Neurexin Ⅱ基因在大鼠及不同胎龄大鼠胚胎肠神经系统的表达及意义

发布时间：2017-08-09 22:10

  本文关键词：Neurexin Ⅱ基因在大鼠及不同胎龄大鼠胚胎肠神经系统的表达及意义

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【摘要】：目的：肠神经系统(Enteric nervous system, ENS)是由分布于消化道管壁内的神经元及神经纤维组成的内在神经网络,接受中枢神经系统(Central nervous system, CNS)的调节,但相对独立的调节胃肠道的运动、消化等各项功能。ENS由神经嵴细胞发育形成,多种基因在其发育形成过程中发挥重要作用,如RET基因、SOX10基因、GDNE基因等。肠神经元发育异常性疾病(Neuronal intestinal malformations, NIM)是一类常见且严重危害患儿健康水平的消化道畸形,以消化管壁神经分布及功能异常为主要特征,是多种因素影响ENS发育,最终导致ENS神经细胞在数量、质量、分布及功能上异常的不同结局,其病因尚未完全阐明。NIM主要包括先天性巨结肠(Hirschsprung's disease, HD)、肠神经节细胞发育不良(Intestinal neuronal dysplasia, IND)、神经节细胞减少症(Hypoganglionosis, HG)、神经节细胞未成熟(Immaturity of ganglion cells, IGC)、混合畸形及未分类的肠神经发育不良。研究证实Neurexins在CNS中广泛表达,且在功能性突触的发生、分化、成熟及维持功能发面均发挥重要作用；我们在前期研究中发现,Neurexins亦在ENS中广泛表达,与胃肠动力紊乱性疾病如HD有密切关系,Neurexins、其配体Neuroligins及相关的神经介质谷氨酸与y-GABA异常是受累肠管蠕动功能障碍的重要原因。据此,实验通过不同实验方法对胎龄16天、18天、20天的大鼠胚胎及出生24小时内的乳鼠(E16组、E18组、E20组、Ep0组)及部分成年大鼠结肠ENS中Neurexin Ⅱ基因的表达进行检测,探讨Neurexin Ⅱ基因与ENS发育的相关关系及Neurexin Ⅱ基因与NIM的可能关系。方法：对清洁级健康的Wistar雌性与雄性大鼠进行随机配组,单独交配使雌鼠受孕,受孕后在相同条件下单独饲养至相应孕龄,麻醉并处死孕龄16、18和20天孕鼠、出生24小时内乳鼠,解剖获取胚胎第16、18、20天和出生24小时内及部分成年大鼠临近回盲部、长度1.0cm左右的结肠全层组织标本。对成年大鼠结肠标本进行免疫组织化学DAB染色,观察Neurexin Ⅱ α蛋白在ENS中的表达及表达部位;运用免疫组织化学DAB染色、Western blot及实时荧光定量PCR检测胎龄16、18、20天大鼠胚胎和出生24小时内乳鼠结肠标本中Neurexin Ⅱ α蛋白及Neurexin Ⅱ mRNA的表达。结果：免疫组织化学DAB染色结果显示Neurexin Ⅱ α蛋白阳性染色成棕黄色或黄褐色,主要表达于ENS肌间神经丛神经节细胞,在黏膜下层及黏膜层亦有少量表达；其达量随胚胎发育自胚胎第16天至出生后第一天逐渐增加。Western blot实验显示Neurexin Ⅱ α蛋白在E16、E18、E20和Ep0各组结肠全层组织提取总蛋白中的相对含量分别为0.054±0.009、0.106±0.020、0.215±0.013、0.280±0.030,随胚胎发育Neurexin Ⅱα蛋白表达逐渐增加,组间比较与两两比较差异均具有统计学意义(P0.05),与免疫组化DAB染色结果所示趋势一致。实时荧光定量PCR实验结果显示在E16、E18、E20和Ep0各组结肠标本中Neurexin Ⅱ mRNA相对表达依次为0.390±0.029、0.552±0.054、0.748±0.065、1.000±0.000,与其在蛋白水平的表达趋势一致,组间比较与两两比较差异均具有统计学意义(P0.05)。结论：Neurexin Ⅱ基因表达于大鼠ENS中；伴随胚胎发育ENS逐渐发育成熟过程中,其表达量逐渐增加,同ENS发育具有时间相关性；在ENS发育过程中,若Neurexin Ⅱ基因功能出现异常可能导致NIM的发生。
【关键词】：肠神经系统 NeurexinⅡ 大鼠 基因表达
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R321
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-11
• 前言11-14
• 实验材料和方法14-27
• 实验结果27-30
• 讨论30-40
• 结论40-41
• 附表及附图41-47
• 参考文献47-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间发表的论文53-54
• 学位论文评阅及答辩情况表54

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