基于恶性疟原虫PHIST特有基因的环介导等温扩增技术的建立与评价

发布时间：2017-10-27 02:29

  本文关键词：基于恶性疟原虫PHIST特有基因的环介导等温扩增技术的建立与评价

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【摘要】：目的建立基于编码恶性疟原虫PHIST蛋白特有基因的环介导等温扩增技术。方法在Plasmo DB数据库中,搜索并筛选编码PHIST、在环状体或裂殖体期高表达且恶性疟原虫特有的基因。利用在线软件Primer Explorer V4设计目的基因LAMP引物。采集恶性疟原虫滤纸血并提取基因组DNA。将提取后的恶性疟原虫DNA用超纯水进行10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)倍比稀释,用LAMP法检测其敏感性;采用间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫基因组DNA作为对照,用LAMP法评价其特异性。结果共筛选出61个编码恶性疟原虫PHIST的基因。选取环状体期高表达的特有基因PF3D7_1372300和裂殖体期高表达的特有基因PF3D7_1401600建立LAMP技术。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法检测恶性疟原虫的最低限度分别为130.5个/μl和1 305.3个/μl,所获得的恶性疟原虫扩增产物其检测管染色后呈绿色,即阳性。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法扩增恶性疟原虫产物检测管染色后呈绿色,即阳性;而间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫的LAMP扩增产物检测管染色后仍呈棕色,即阴性。结论基于PF3D7_1372300基因的LAMP法检测恶性疟原虫敏感、特异、简便、实用,可用于恶性疟流行区现场调查和临床诊断。
【作者单位】： 湖北医药学院;湖北省武汉市疾病预防控制中心;江苏省血吸虫病防治研究所;第三军医大学;广东省潮州市中心医院;
【关键词】： 恶性疟原虫 PHIST蛋白 环介导等温扩增技术
【基金】：湖北省自然科学基金(2014CFB648)
【分类号】：R531.3
【正文快照】： 疟疾是严重危害人类健康的全球三大公共卫生问题之一[1],其中以恶性疟原虫感染引起的恶性疟最为危险致命。该病在撒哈拉以南非洲地区流行普遍,发病率和死亡率极高,特别是孕妇和5岁儿童深受其害[2]。WHO发布的《2015年世界疟疾报告》显示,2014年全球约有2.14亿新增疟疾病例,其

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3 雷俊川;缪军;李s，

本文编号：1101572