Nrf2信号通路抑制后对细粒棘球蚴原头节生长的影响

发布时间：2017-10-27 02:31

  本文关键词：Nrf2信号通路抑制后对细粒棘球蚴原头节生长的影响

  更多相关文章： 细粒棘球蚴原头节 Nrf2 维甲酸 免疫荧光定位

【摘要】：目的:本实验以体外培养的细粒棘球蚴原头节为研究对象,观察维甲酸(RA)对细粒棘球蚴原头节内Nrf2信号通路的抑制作用,并进一步探讨Nrf2信号通路抑制后体外对细粒棘球蚴原头节的作用。方法:无菌条件下,从自然感染细粒棘球蚴病的绵羊肝脏中获取细粒棘球蚴原头节,并置RPMI 1640培养基中体外培养。将不同浓度的RA(2、4、6、8和10μmol/L)体外作用于细粒棘球蚴原头节,并设立空白对照组。采用共聚焦免疫荧光技术检测原头节内Nrf2的定位及表达变化;通过WST法及ELISA法测定RA作用后原头节GST及HO-1的活性变化。各组原头节经0.1%伊红溶液染色后于光镜下观察活力及形态变化,实验独立重复3次,并绘制活力曲线。用扫描电子显微镜(SEM)观察原头节表面超微结构改变。不同浓度RA作用原头节24h、48h后,用caspase-3检测试剂盒检测caspase-3酶活性。结果:免疫荧光定位表明Nrf2绿色荧光主要分布于细粒棘球蚴原头节的细胞质中,8μmol/LRA作用后,绿色荧光强度及定位均未见明显改变。RA作用后的原头节GST和HO-1活性均显著下降(P0.05),且呈时间及剂量依赖性。不同浓度RA均有抑制原头节生长的作用,以8μmol/L和10μmol/LRA对原头节杀伤作用较明显,至培养第5d,8μmol/L组原头节活力仅为9.58%,而10μmol/L组原头节已全部死亡。随着药物作用时间的延长,RA对原头节的杀伤作用越明显。SEM观察显示,RA可明显破坏原头节表面超微结构,引起虫体表层塌陷、顶突变形及微毛脱落,当药物浓度及作用时间增加后,损伤加重,出现顶突界面缺损、吸盘变形,体表还可见大量虫蚀样改变及指状突起。此外,不同浓度RA作用原头节24h、48h后,caspase-3酶活性较正常对照组显著增高(P0.05)。结论:1.维甲酸可有效抑制细粒棘球蚴原头节内Nrf2调控的下游GST、HO-1的活性,但对Nrf2的表达水平没有影响。2.维甲酸体外作用可明显抑制细粒棘球蚴原头节生长,促进其凋亡。
【关键词】：细粒棘球蚴原头节 Nrf2 维甲酸 免疫荧光定位
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R532.32
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 英文缩略语表7-8
• 前言8-11
• 材料11-14
• 1.实验原头节采集11
• 2.主要实验试剂11-12
• 3.主要实验仪器12-13
• 4.主要溶液配制13-14
• 方法14-20
• 1.细粒棘球蚴原头节的获取及体外培养14
• 2.RA体外作用于细粒棘球蚴原头节14
• 3.共聚焦免疫荧光技术检测Nrf2在细粒棘球蚴原头节的表达14-15
• 4.WST试剂盒检测原头节GST活性15-16
• 5.ELISA试剂盒检测原头节HO-1 活性16-17
• 6.光学显微镜观察原头节形态和活力变化17
• 7.扫描电子显微镜观察原头节表面超微结构变化17
• 8.RA作用后原头节内caspase-3 活性检测17-19
• 9.统计学分析19-20
• 结果20-27
• 1.荧光共聚焦显微镜观察细粒棘球蚴原头节Nrf2的定位及表达变化20-21
• 2.RA体外作用后细粒棘球蚴原头节GST和HO-1 的活性变化21-23
• 3.RA体外作用对细粒棘球蚴原头节形态的影响23-24
• 4.RA体外作用对细粒棘球蚴原头节活力的影响24
• 5.RA体外作用对细粒棘球蚴原头节表面超微结构的影响24-25
• 6.RA体外作用后细粒棘球蚴原头节caspase-3 酶活性的变化25-27
• 讨论27-30
• 结论30-31
• 参考文献31-36
• 综述36-46
• 参考文献42-46
• 致谢46-47
• 作者简介47-48
• 导师评阅表48

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王虎，，阎海玉，武海燕;青海高原不同宿主体内原头节的透射电镜观察[J];地方病通报;1994年03期

2 陈新华,温浩,刘辉,张琰,阿孜古丽·吐尔逊,林仁勇,张金辉,马旭东,郑树森;抗棘球蚴人源单链可变区抗体抑制人体包虫原头节的初步实验[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年09期

3 康金凤;胡汉华;陈蓉;武贵臻;杜同心;丁智慧;贺晓燕;;棘球蚴原头节细胞凋亡的观察[J];中国人兽共患病学报;2010年05期

4 蒋次鹏,刘约翰;小鼠泡球蚴包囊壁的原头节组织发生[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1995年03期

5 吴笃卿;;用吡喹酮体外处理细粒棘球蚴原头节所需最短时间的测定[J];地方病译丛;1989年02期

6 肖树华,沈炳贵,杨元清,尤纪青,许东辉,柴君杰,张文林;吡喹酮和阿苯达唑对细粒棘球蚴原头节超微结构的影响[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;1988年S1期

7 孙冯;吕海龙;王成华;张晶;雷颖;彭心宇;姜玉峰;;胆汁对体外细粒棘球蚴原头节的作用[J];中国现代医学杂志;2014年02期

8 孙冯;吕海龙;王成华;张晶;雷颖;彭心宇;姜玉峰;;胆汁对体外细粒棘球蚴原头节的作用观察[J];中国病原生物学杂志;2014年01期

9 康金凤;胡汉华;白山别克;陈蓉;阿不力孜;;过氧化氢体外诱导细粒棘球蚴原头节细胞凋亡的实验观察[J];中国寄生虫学与寄生虫病杂志;2008年05期

10 冯建军;;左旋咪唑和伊维菌素体外抗细粒棘球蚴原头节的作用[J];国外医学(寄生虫病分册);1991年01期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 陈钦铭;叶于聪;许子俊;寇星灿;;直茎紫堇对人体细粒棘球蚴与原头节作用的电镜观察[A];第四次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1986年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 张静;自制SAR协同HIFU杀灭细粒棘球蚴的研究[D];重庆医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前6条

1 王勃;三氧化二砷对细粒棘球蚴原头节生长的影响及作用机制[D];石河子大学;2015年

2 邢国强;Nrf2信号通路抑制后对细粒棘球蚴原头节生长的影响[D];石河子大学;2016年

3 张晶;P38抑制剂体外对细粒棘球蚴原头节的作用[D];石河子大学;2013年

4 孙冯;抑制GRP78表达对细粒棘球蚴原头节生长的影响[D];石河子大学;2014年

5 王卓;Nrf2抑制剂对细粒棘球蚴原头节的作用[D];石河子大学;2015年

6 刘玉红;TNF-α诱导细粒棘球绦虫原头节细胞凋亡初步研究[D];新疆医科大学;2007年

本文编号：1101580