基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

发布时间：2017-10-29 19:30

  本文关键词：基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

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【摘要】：目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。
【作者单位】： 重庆理工大学药学与生物工程学院;中国动物卫生与流行病学中心;宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心;重庆市垫江县中医院;
【关键词】： 布鲁氏菌 荧光定量PCR 外源内参 内源内参
【基金】：宁夏地区主要人兽共患病防控关键技术研究与示范(No.2013ZZN30)资助~~
【分类号】：R440;R516.7
【正文快照】： (1.Chongqing University of Technology,Chongqing400054,China;2.China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao 266110,China;3.Ningxia Hui Autonomous Region Animal Disease Prevention and Control Center,Ningxia,750000,China;4.Dianjiang Hospital of Tradi

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本文编号：1114391