乙型肝炎病毒母婴传播的阻断及免疫阻断失败母子病毒准种的检测

发布时间：2018-03-26 15:02

本文选题：乙型肝炎病毒　切入点：免疫预防　出处：《吉林大学》2017年博士论文

【摘要】：常规的乙型肝炎疫苗(hepatitis B vaccine,HepB)联合乙肝免疫球蛋白(hepatitis B immune globulin,HBIG)的主被动免疫阻断方案已经显著降低乙肝母婴传播率,但0.75-9.66%婴儿因免疫阻断失败而感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV),其中高达90%的HBV感染婴儿会慢性化,而慢性HBV感染则是肝硬化、肝衰竭和肝脏肿瘤的高风险因素。这项研究目的在于调查一项改良后的免疫阻断方案对乙肝母婴传播(mother to child transmission,MTCT)的保护性,探索免疫阻断失败和疫苗低反应性的可能危险因素;因关于HBV传播的瓶颈和母婴之间HBV病毒准种的演变情况尚知之甚少,本研究将在深度测序技术的基础上,加入特异性标签,更准确的定位所有病毒序列,针对母婴阻断失败的母子进行病毒序列的比对,寻找母婴阻断失败的病毒学因素。研究方法:(1)这项前瞻性观察性队列研究自2012年7月开始,至2015年4月结束,863名乙肝病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性孕妇及其871名婴儿(8对双胞胎)纳入该研究中。根据孕妇乙肝病毒E抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)状态不同给婴儿注射不同乙肝疫苗剂量(E抗原阳性孕妇所生婴儿注射乙肝疫苗20μg;阴性则注射10μg),并注射HBIG100IU,规定HBIG和首针乙肝疫苗在婴儿出生2小时之内即注射完毕,婴儿1、6个月龄时分别接种乙肝疫苗各一次。婴儿HBV感染情况在满7个月之后检测,采用非条件logistic回归方法分析免疫阻断失败和对疫苗低反应的相关因素。(2)对于免疫阻断失败的母子对,采用特殊标签深度测序的方法,针对每个病毒序列设计一个包含13核苷酸随机标签,每个病人标记上独一无二的序列标签,针对RT区1.25kb的序列进行扩增。利用深度测序的方法,成功获得了4对母婴阻断失败的母子的队列信息。深度测序分辨率为0.1%,利用r语言对shannon熵和sorensen指数进行分析,并利用muscle对多重序列进行校对。研究结果:(1)871名婴儿中,16名婴儿免疫阻断失败,婴儿hbv感染率为1.84%(16/871),e抗原阴性母亲所生的565名婴儿在7月龄检查时均阻断成功,阻断率达100%,e抗原阳性母亲所生的306名婴儿中,16名婴儿(5.2%)免疫阻断失败。进一步分析显示hbvdna≥108iu/ml(or=4.53,95%ci:1.19-17.34),延迟注射(or=4.1495%ci:1.00-17.18)和不足量注射(or=7.69,95%ci:1.71-34.59)和免疫阻断失败独立相关。96.5%免疫阻断成功婴儿体内有足量滴度的乙肝表面抗体(antibodytohbsag,anti-hbs)(anti-hbs≥100miu/ml)。对于足月婴儿,体重3000g和疫苗低反应性相关(or=2.47,95%ci:1.02-5.99)。(2)该研究成功获取了4对乙肝免疫阻断失败的母子的病毒序列。8个患者均感染c亚型的hbv。为了检测宿主体内病毒准种的多样性,我们用shannon熵(sn)来表示,所有患者sn波动值在0.33-0.81,母子之间的sn值无显著差异(p=0.2,配对t检验)。用所有患者10个主要准种进行准种进化树的建立,应用phyml程序利用gtr模式采用最大相似法进行树状结构建立。病毒准种在每对母亲孩子内聚集,不同母子对之间是分离的。第2和4对母亲孩子病毒准种显示更高相似性,在进化树的混合枝可以体现。我们检测第1和3对患者中孩子样本最新的显性变异,是否存在某些有益突变。第3对患者的孩子有一个显性单一突变g145a,第1对患者孩子有一个双突变d144g-g145e发生。1和3母亲样本中g145a和d144g-g145e具有稍微高的百分比。然而,所有这些都是微小变异,发生频率小于1%,非常规方法能检测出。研究结论:此改良后的免疫阻断方案对hbv母婴传播的阻断是有效的。孕妇高病毒载量,疫苗不足量和首针延迟注射和免疫阻断失败相关,多数婴儿免疫预防后体内可产生足够水平的保护性抗体(anti-hbs)。乙肝表面抗原基因变异可能是导致免疫阻断失败的原因。hbv传播的弱瓶颈效应提示孕期控制病毒载量可能是进一步降低母婴传播的重要手段。
[Abstract]:Hepatitis B vaccine ( HBIG ) and hepatitis B immune globulin ( HBIG ) were infected with hepatitis B virus ( HBV ) , but 0.75 - 9.66 % of infants were infected with hepatitis B virus ( HBV ) . Results : ( 1 ) In 871 infants , 16 infants received a unique sequence tag . The results were as follows : ( 1 ) In 871 infants , 16 infants were blocked successfully . The results showed that the total number of infants with HIV infection was 1 . 84 % ( or = 4.1495 % ci : 1.19 - 17.18 ) and that of the immune block failure . The results show that the improved immune blocking scheme is effective in preventing mother - to - child transmission . However , all of these are minor variations , with a frequency of less than 1 % , and the non - conventional method can detect .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R512.62

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