人苍白杆菌的耐药表型、基因型和分子流行病学的研究

发布时间：2018-04-21 08:15

  本文选题：入苍白杆菌 + 耐药表型　； 参考：《广州中医药大学》2015年硕士论文

【摘要】：研究背景和目的：人苍白杆菌(Ochrobactrum anthropi)属于苍白杆菌属,是一种非发酵型的革兰阴性需氧杆菌。上世纪80年代以前人们普遍一直认为其不具临床意义,无致病性。但自1980年Appelbaum等报道道第1例人苍白杆菌引起胰腺脓肿病例以来,人感染苍白杆菌的报道越益增多,逐渐引起了人们重视。目前,绝大多数研究者已认为,人苍白杆菌是一类条件病原菌,其感染往往与患者局部或全身免疫功能低下有关,如移植器官,肿瘤晚期或使用免疫抑制剂、过度劳累等,可引起败血症、脑膜炎、腹膜炎等疾病[2-4]。但近年国内外也不断有报道人苍白杆菌可造成免疫功能正常人群发病,因此该菌已被认为是一种人类致病菌。Vaidya等通过Medline检索了1989-2005年与人苍白杆菌相关的122篇医学文献中41篇是人苍白杆菌感染的临床个案报道,其中15篇是免疫功能正常人感染该菌的文献。我国目前开展类似于16S基因测序的单位为数不多,现临床上多数采用Vitek2、 API鉴定细菌,但二者的对苍白杆菌属的鉴定只有人苍白杆菌这唯一的结果,会错误地将苍白杆菌属的其他种鉴定为人苍白杆菌(比如中间苍白杆菌、解糖精假苍白杆菌等),同时也有可能将其他生化反应与之类似的菌错误的鉴定为人苍白杆菌(如玫瑰单胞菌属),所以大部分医院对于苍白杆菌属的鉴定通常只有人苍白杆菌一个种,该鉴定方法存在一定局限性。关于人苍白杆菌耐药性及其耐药机制的研究,国内外少见有报道且研究内容也十分笼统。目前对于人苍白杆菌耐药性的报道主要为对于亚胺培南、氨基糖苷类、喹诺酮类药物敏感,对一、二、三代头孢、青霉素类耐药,对于头孢吡肟的耐药率存在一定的差别。但这些研究报道所纳入的实验菌株鉴定仅仅依靠Vitek2、API方法,而根据蔡婷婷[3]同学的前期实验内容,我们发现其实人苍白杆菌、中间苍白杆菌、解糖精假苍白杆菌之间的耐药特点迥然不同。因此针对人苍白杆菌的耐药情况,本实验对17株经16S rRNA基因测序鉴定为人苍白杆菌临床分离株进行耐药表型、基因型和分子流行病学的研究,(1)采用Vitek2 Compact革兰阴性菌AST-GN13药敏鉴定微量肉汤法及聚合酶链反应(PCR)检测人苍白杆菌的耐药表型和常见耐药基因型,从不同层面上发现人苍白杆菌的多重耐药情况和耐药机制;(2)采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对这些地区人苍白杆菌进行同源性分析,明确所感染的菌株是否同源,判断是散在性感染还是暴发流行性感染,为预防和控制该地区医院感染提供理论依据。方法：收集2012年2月至2013年5月从广州,北京,湖南和广州金域医学检验中心分离保存17株非重复人苍白杆菌临床分离株。所有菌株经李工厂等人采用16S rRNA基因测序鉴定人苍白杆菌。(1)采用Vitek2 Compact革兰阴性菌AST-GN13药敏鉴定微量肉汤法检测17株人苍白杆菌对11种常见抗菌药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC):(2)采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测整合子遗传标记intI1、intI2、intI3,A类超广谱β-内酰胺酶基因GES、TEM、PER、CTX-M、VEB、SHV、CARB,头孢菌素酶ampC、ampR、DHA-1,氨基糖苷修饰酶基因aac(6')-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、 ant(3")-Ⅰ、aph(3')-Ⅰ、aph(3')-Ⅱ、aph(3')-Ⅳ、aadA2,外排泵基因qacE△1、 mdfA、adeB以及16S rRNA甲基化酶rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、armA、npmA等相关耐药基因；(3)采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对17株人苍白杆菌进行分子分型和菌株间的同源性分析。结果：(1)17株0.anthropi对氨曲南(ATM)、 三代头孢菌素(CAZ)和哌拉西林/他唑巴坦(TZP)耐药率均100%；对第四代头孢菌素(FEP)敏感株为7株(41.2%),表现为部分耐药；而对高敏感性药物有以下：阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GM)和妥布霉素(TOB)等氨基糖苷类抗菌药物的敏感率分别为94.1%、88.2%、94.1%；亚胺培南(IMP)、复方新诺明(SXT)敏感率分别为88.2%、94.1%；对喹诺酮类抗生素左氧氟沙星(LVLX)、环丙沙星(CIP)为100%敏感。其中编号为5652的人苍白杆菌对阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GM)和妥布霉素(TOB)氨基糖苷类抗生素均表现耐药.(2)17株人苍白杆菌中,整合子遗传标记物检出率为intI1(5.9%,1株)、intI3(5.9%,1株)；β-内酰胺酶基因检出率为ampC(100%,17株)、ampR(100%,17株),氨基糖苷修饰酶基因检出率为aac(6")-Ⅰ(5.9%,1株)、ant(3")-Ⅰ(5.9%,1株)、aadA2(5.9%,1株)及外排泵基因qacE△1(5.9%,1株)；而DHA-1、int12、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ、aph(3')-Ⅵ、aph(3')-Ⅰ、aph(3')-Ⅱ、 rmtA、rmtD、armA、rmtB、rmtC、npmA、adeB、mdfA、TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、 CARB等基因无阳性检出,其中人苍白杆菌(编号为5652)除ampC、ampR外,还检测出携带多种抗生素耐药基因,包括整合子基因intI1、intI3与氨基糖苷修饰酶基因aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、aadA2及外排泵基因qacE△1。(3)17株人苍白杆菌的脉冲场凝胶电泳图谱可划分成11个基因型(A-K),其中A型4株、B型3株、C型2株、D—K型各1株；经过对A型至K型各型中的菌株来源进行查证,发现各菌株来源于不同医院的不同时期,且检测菌株数量有限,PFGE结果未能说明人苍白杆菌构成地区性暴发流行。结论：这些地区17株人苍白杆菌均具有较高的耐药率,而且与耐药基因的表达情况有较好的相关性。产生头孢菌素酶(AmpC酶)可能是本研究17株人苍白杆菌对头孢菌素类抗生素耐药的最主要原因；除了整合子遗传标记intI1、intI3外,编号为5652的人苍白杆菌株还扩增出多种类型的耐药基因,包括氨基糖苷修饰酶基因aac(6')-Ⅰ、ant(3")-I、aadA2及外排泵基因qacE△1一系列耐药基因,与其药敏表型结果相符。经Blast比对分析,这些耐药基因序列与铜绿假单胞菌、肺克等耐药菌的同型耐药基因呈高度同源,这说明人苍白杆菌除了本身携带的耐药基因的诱导表达外,还有可能通过整合外环境中其它细菌的耐药基因从而介导细菌耐药,也表明细菌的耐药机制日趋复杂。17株人苍白杆菌的脉冲场凝胶电泳结果未能说明本地区发生暴发性流行,但由于人苍白杆菌的带有多重耐药特征,因此需积极配合医院感染管理部门进行耐药性监测,防止医院感染和暴发流行。
[Abstract]:The research background and purpose : Ochrobactrum anthropi belongs to the genus Streptomyces and is a non - fermented Gram - negative aerobic bacterium . ( 1 ) The resistance phenotype and drug - resistant mechanism of human pale - bacilli were detected by the method of AST - GN13 and PCR . The isolates were analyzed by pulsed - field gel electrophoresis ( PFGE ) . ( 1 ) The minimal inhibitory concentration ( MIC ) of 17 strains of human pale bacilli to 11 kinds of common antibacterial drugs was determined by the method of AST - GN13 . The minimal inhibitory concentration ( MIC ) was determined by polymerase chain reaction ( PCR ) .
( 3 ) By using PFGE , 17 strains were analyzed by molecular typing and homology analysis between strains . Results : ( 1 ) The resistance rates of 17 strains were 100 % .
7 strains ( 41.2 % ) of the fourth generation cephalosporin ( FEP ) strain were resistant to partial resistance .
The sensitive rates of AMK , GM and TOB were 94.1 % , 88.2 % and 94.1 % , respectively .
Imipenem ( IMP ) and compound sulfamethoxazole ( SXT ) were 88.2 % and 94.1 % , respectively .
( 2 ) The detection rate of integrated subgenetic markers was intI1 ( 5.9 % , 1 strain ) and intI3 ( 5.9 % , 1 strain ) .
The detection rate of 尾 - lactamase gene was ampC ( 100 % , 17 strains ) , ampR ( 100 % , 17 strains ) , the detection rate of amino - glycoside - modified enzyme gene was 3 - ( 6 " ) - 鈪，

本文编号：1781619