HCV感染人肝癌Huh7.5.1细胞后差异表达的lncRNA及其对细胞增殖的影响

发布时间：2018-04-24 06:16

  本文选题：丙型肝炎病毒(HCV) + 长链非编码RNA　； 参考：《病毒学报》2017年02期

【摘要】：丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是导致人类肝脏疾病的重要病原体。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)参与了许多疾病和生物过程的调控,但是lncRNA在HCV感染中的作用还了解很少。本研究旨在筛选HCV感染人肝癌细胞系Huh7.5.1后差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),并研究相关lncRNA对细胞增殖及周期相关基因表达的影响。首先,分析HCV感染Huh7.5.1细胞72h前后lncRNA芯片表达谱;然后采用实时荧光定量PCR(Reverse tanscription-quantitative real time PCR,RT-qPCR)的方法对芯片中差异表达明显的17条lncRNA进行细胞水平验证;进一步采用CCK8以及ki67细胞增殖实验研究差异表达最明显的lncRNA对细胞增殖的影响;最后采用RT-qPCR探讨lncRNA对细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的mRNA表达的影响。lncRNA芯片检测结果与RT-qPCR验证的相符的lncRNA中,发现HCV感染Huh7.5.1细胞后上调和下调最明显的两条lncRNA分别是RP11-288L9.1与ADAM20P1,而沉默RP11-288L9.1能抑制细胞周期蛋白基因cyclin B1/D1/E1的表达水平,并抑制Huh7.5.1细胞增殖。首次发现HCV感染后上调的RP11-288L9.1能促进细胞周期蛋白基因的表达水平和Huh7.5.1细胞增殖,另一种下调的ADAM20P1对细胞增殖影响不大。研究结果为HCV感染及肝癌细胞增殖提供了潜在的诊断标志物和治疗的新型靶点,具有一定的参考价值。
[Abstract]:Hepatitis C virus (HCV) is an important pathogen leading to human liver disease. Long chain noncoding RNA(Long noncoding RNAs participate in the regulation of many diseases and biological processes, but little is known about the role of lncRNA in HCV infection. The aim of this study was to screen the differentially expressed long chain noncoding RNAs (LNNRNAs) in human hepatocellular carcinoma cell line (Huh7.5.1) after HCV infection, and to investigate the effects of lncRNA on cell proliferation and cell cycle related gene expression. Firstly, the expression profiles of lncRNA microarray were analyzed before and after HCV infection in Huh7.5.1 cells for 72 hours, and then 17 differentially expressed lncRNA fragments were detected by real-time quantitative PCR(Reverse tanscription-quantitative real time PCRRT qPCRR assay. CCK8 and ki67 cell proliferation experiments were used to study the effect of lncRNA, which is the most obvious differentially expressed, on cell proliferation. Finally, RT-qPCR was used to investigate the effect of lncRNA on the mRNA expression of cyclin gene cyclin B1/D1/E1. It was found that the two most obvious up-regulated and down-regulated lncRNA were RP11-288L9.1 and ADAM20P1 after HCV infection in Huh7.5.1 cells. Silencing RP11-288L9.1 could inhibit the expression of cyclin B1/D1/E1 and inhibit the proliferation of Huh7.5.1 cells. It was found for the first time that the up-regulated RP11-288L9.1 after HCV infection could promote the expression of cyclin gene and the proliferation of Huh7.5.1 cells, while another down-regulated ADAM20P1 had little effect on cell proliferation. The results provide a potential diagnostic marker and a new target for the treatment of HCV infection and hepatoma cell proliferation.
【作者单位】： 武汉大学病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院免疫学系;
【基金】：国家自然科学基金(项目号:21572173),题目:以丙型肝炎病毒RNA-G4为新型靶标的配体分子的筛选及其抗病毒活性研究;国家自然科学基金(项目号:31370197),题目:基于适配子靶向病毒蛋白的策略研究HCV导致肝癌的机制与规律~~
【分类号】：R512.63;R735.2

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