组胺对于HIV-1肠道黏膜感染的作用研究

发布时间：2018-05-02 18:06

  本文选题：HIV-1 + 组胺　； 参考：《南京医科大学》2013年硕士论文

【摘要】：目的 为了探讨肥大细胞及其释放的过敏介质对于HIV-1黏膜感染的影响，1.建立获取和培养人原代肥大细胞的方法；2.以不成熟树突状细胞为研究对象，经肥大细胞释放的介质组胺和HIV-1干预后，检测树突状细胞的活化及促进初始CD4~+T细胞分化能力的改变情况，以便于更好地理解过敏和HIV-1感染的关系以及HIV-1的致病机理，为疾病的治疗提供新思路。 方法 1.用细胞因子SCF、IL-6和IL-3刺激CD34~+造血干细胞使之分化成肥大细胞；Percoll密度梯度离心结合免疫磁珠分选法，分离肠道黏膜肥大细胞。应用免疫荧光染色技术分析所获得的原代肥大细胞表面分子CD117和FcεRⅠ，通过甲苯胺蓝染色或间接免疫荧光染色检测胞内类胰蛋白酶含量。 2.首先用免疫磁珠分选技术从外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC）中分选出单核细胞，体外培养时加入GM-CSF和IL-4，使其分化为不成熟树突状细胞（immaturedendriticcells，iDC）。接着用组胺和/或单次感染HIV-1假病毒JRFL处理iDC，通过流式细胞术（FCM）观察DC表型的变化，并提取各种处理后DC的RNA，通过实时荧光定量PCR（real-timePCR）检测DC分泌的细胞因子，同时也用FCM从蛋白水平对细胞因子进行定量检测。之后，将不同处理的DC与从PBMC分选出的初始CD4~+T细胞（naveCD4~+Tcell）或静息CD4~+T细胞进行共培养，通过流式细胞术观察DCs促T细胞增殖和调节性T细胞（regulatoryCD4~+Tcell，Treg）分化能力的改变。用real-timePCR和FCM检测不同处理组DC上吲哚2,3双加氧酶（indoleamine2,3-dioxygenase，IDO）的表达情况，通过加入IDO拮抗剂1-甲基色氨酸（1-MT），观察DC功能的改变是否和IDO相关。再针对DC上组胺受体表达情况，加入吡拉明（pyrilamine，H1R拮抗剂），西咪替丁（cimetidine，H2R拮抗剂）和噻普酰胺（thioperamide，H3R和H4R拮抗剂），用real-timePCR检测，找出与IDO产生相关的组胺受体。 结果 1.黏膜肥大细胞及CD34~+造血干细胞刺激分化而来的肥大细胞均表达CD117和FcεRⅠ，胞内均含有类胰蛋白酶。 2.iDC上表达组胺受体H1R,H2R和H4R，几乎不表达H3R；与未处理组DC相比，组胺和单次感染HIV-1假病毒JRFL单独处理组不能引起或仅在一定程度上能促使DC表面CD86、CD83和HLA-DR表达增加，但二者共处理组的DC上CD86和CD83表达明显增加（P0.05），趋向于活化、成熟；与未处理组比较，组胺和JRFL单独处理组均促进了DC分泌IL-10，在共处理组，组胺可增强JRFL引起的IL-10的分泌，而降低JRFL引起的IL-12的分泌，对于JRFL引起的TGF-β仅有较弱的促进作用，对于IL-6的影响没有统计学意义（P0.05）；在DC功能检测方面，组胺和JRFL单独处理组的DC对于静息CD4~+T细胞和初始CD4~+T细胞的增殖没有或仅有较弱的影响，而共处理组的DC可明显促进静息CD4~+T细胞（P0.05）和初始CD4~+T细胞（P0.05）的增殖；在DC促进初始CD4~+T细胞向Tregs分化方面，共处理组也具有更明显的效应（P0.05），该组分化后T细胞的抑制增殖能力也更强（P0.05）；与未处理组相比，组胺和JRFL均可促进IDO的产生，而共处理组的IDO表达（mRNA水平和蛋白水平）明显增加（P0.05），分化后Tregs的抑制增殖能力可被IDO拮抗剂1-MT所逆转，提示Treg的分化与IDO相关；当加入组胺H2R阻断剂西咪替丁，DC上IDO的表达明显降低（P0.05），提示组胺是通过结合DC上H2R导致IDO的产生。 结论 1.两种方法均可以有效地获得大量纯化的原代肥大细胞，且各有优势，所得细胞适用于肥大细胞在HIV-1黏膜感染方面的后续研究。 2.肥大细胞释放的介质组胺参与了HIV-1对于不成熟DC的感染过程中，降低促炎细胞因子的产生，，促进抑制性细胞因子的分泌，并且通过H2R辅助HIV-1，刺激DCs产生更多IDO，诱导初始CD4~+T细胞朝向调节性T细胞分化，进一步促进免疫抑制环境的产生。
[Abstract]:Purpose

To investigate the effects of mast cells and their release on HIV - 1 mucosal infection , 1 . Methods of obtaining and culturing human primary mast cells were established .
2 . In order to better understand the relationship between allergy and HIV - 1 infection and the pathogenesis of HIV - 1 , we provide a new idea for the treatment of diseases .

method

1 . Using cytokines SCF , IL - 6 and IL - 3 to stimulate CD34 ~ + hematopoietic stem cells to differentiate into mast cells ;
The expression of CD117 and Fc.epsilon . R鈪

本文编号：1834935