乙型肝炎病毒前S1缺失突变对病毒生物学活性的影响研究

发布时间：2018-05-22 17:54

  本文选题：乙型肝炎病毒 + 前S区　； 参考：《桂林医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的：分析乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）前S缺失突变在慢性乙型肝炎轻中度、慢性乙型肝炎重度和慢加急性肝衰竭患者中的检出率；分析前S1缺失突变病毒株体外复制力、HBsAg分泌、RNA水平、前S1抗原表达及其对表面抗原启动子Ⅱ（Surface antigen promoter Ⅱ, SPⅡ）转录活性的影响。方法：研究对象为119例于2005年8月-2008年5月在解放军第三0二医院诊疗的住院患者，包括38例慢性乙型肝炎（以下简称慢乙肝）轻中度、40例慢乙肝重度和41例慢加急性肝衰竭患者。从患者血清中提取HBVDNA，PCR扩增获得HBV全长基因组序列，统计前S缺失突变的发生率。挑选有代表性的前S1缺失突变株及其相应对照的野生型HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中。用BspQⅠ/ScaⅠ双酶切1.0倍HBV基因组，72小时后检测体外病毒复制力及HBsAg表达水平，同样的方法转染HepG2细胞，72小时后提取HBV RNA，用相对荧光定量法检测RNA水平。构建1.1倍pTriEX-HBV（C）表达载体，转染HepG2细胞，72小时后，酶联免疫法测前S1抗原的表达。用PCR分别扩增含有前S1缺失突变型和野生型的HBVSPⅡ启动子片段，构建pGL3-SPⅡ双荧光素酶真核报告表达载体，转染细胞48小时后检测相对荧光素酶活性，分析前S1区缺失突变对重叠的SP Ⅱ启动子区荧光素酶活性表达的影响。结果：①HBV基因组前S缺失突变检出率在慢乙肝轻中度、慢乙肝重度和慢加急性肝衰竭三组中逐渐递增，分别为5.3%、12.5%和24.4%，差异有统计学意义（P0.05）。②与未缺失野生株相比，前S1缺失突变病毒株的体外复制力和分泌的HBsAg水平分别降低了69%和23.7%；前S1缺失株的3.5kb前基因组RNA、2.4kb mRNA和2.1kb mRNA水平分别降低了87.67%、91.40%和85.94%。③与未缺失野生株相比，前S1区缺失导致前S1抗原表达消失。④与未缺失野生型相比，前S1缺失突变使重叠的SP Ⅱ启动子的转录活性降低了36%。结论：HBV前S缺失突变发生率随乙肝病程进展而逐渐升高，前S1缺失突变株病毒的体外复制力水平、HBsAg的分泌及RNA水平均不同程度降低，，并导致前S1抗原表达消失；同时前S1缺失突变导致重叠的SPⅡ启动子转录活性降低。结果有助于阐明HBV前S1区缺失突变的临床和病毒生物学意义。
[Abstract]:Objective: to analyze the detection rate of hepatitis B virus (HBV) pre-S deletion mutation in patients with chronic hepatitis B (CHB), severe chronic hepatitis B (CHB) and chronic and acute hepatic failure (AHF). The expression of preS1 antigen and its effect on the transcriptional activity of surface antigen promoter 鈪

本文编号：1923060