乙型肝炎重症化过程中microRNA-210的改变及功能研究

发布时间：2018-10-31 15:38

【摘要】：研究目的 乙型重型肝炎病死率高,预后差。寻找可用于早期预示和早期诊断重型肝炎发生的分子标志物是目前病毒性肝炎研究的热点之一。越来越多的证据表明循环microRNAs (cir-miRNAs)可能作为潜在的疾病诊断生物标志物。本课题旨在研究乙型肝炎重症化过程中血清1miRNA表达谱的变化以筛选差异表达的microRNA-210(miRNA-210).评价血清miR-210水平与乙型肝炎重症化进程的关联关系、探讨miR-210在乙型肝炎重症化过程中的潜在功能及其作用机制,为乙型肝炎重症化的早期预测、预防和治疗提供新型靶标。 研究方法 1miRNA芯片实验 (1) miRNA表达谱分析： 用TaqMan(?) Human MicroRNA Array A分析健康人混合血清样本(10例等体积混合)、慢乙肝轻度病人混合血清样本(10例等体积混合)、乙型慢加急肝衰竭病人混合血清样本(10例等体积混合)的miRNAs表达谱。 (2)筛选差异表达]miRNAs: 以(Ct35)且(|△△Ct|≥2)为判定标准,初步筛选可扩增检测到的差异表达的1miRNAs。 (3)候选miR-210的选择：以(Ct35)且(△△Ct≤-2)为判定标准,进一步筛选随着乙型肝炎病情严 重程度表达水平升高的miR-210用于单样本RT-qPCR验证。 2人群调查 (1)血清样本：30例慢乙肝轻度病人血清、30例慢乙肝重度病人血清、30例乙型慢加急肝 衰竭病人血清及30例健康对照血清。 (2)miR-210的再验证：针对miRNA芯片筛选出来的差异表达的miR-210进行单样本RT-qPCR验证。 (3)其他检测指标：肝功能(ALT、AST、TBIL、PTA),血清HBV标记物,病毒载量。 3动物实验经小鼠尾静脉注射Con A (20mg/kg)制备小鼠急性肝衰竭模型，并于注射后 6、12、24小时处死动物,收集外周血和肝组织,检测下列指标： (1)缺氧探针染色：检测缺氧肝细胞。 (2)荧光定量PCR：检测肝组织和血清miR-210水平。 (3)荧光定量PCR：检测小鼠肝组织miR-210靶基因Iscu、Ndufa4、Sdhd、Gpd11和Cox10mRNA水平。 4.体外实验 HepG2.2.15细胞分别转染空白对照(DEPC水)、模拟物阴性对照和miR-210模拟物后,缺氧培养24h或48h后检测下列指标： (1) CCK8assay:检测HepG2.2.15细胞线粒体脱氢酶活性。 (2)病毒学指标检测：培养基上清HBsAg、HBeAg、HBV DNA拷贝数；HepG2.2.15细胞内HBsAg mRNA水平。 研究结果 1miRNA芯片实验结果 (1)血清中可检测到miRNA的数量和表达水平随着病情进展显著增加。 (2)乙型肝炎病人血清let-7b等20个miRNAs表达水平显著高于健康对照组。 (3)血清中miR-210、miR-324-5p、miR-423-5p表达水平随着病情进展显著升高。 2人群调查结果 (1)轻/重度乙型肝炎和乙型慢加急肝衰竭病人血清中miR-210的水平显著高于健康对照组(P0.05),血清中miR-210表达水平随着乙型肝炎病情进展显著性升高。 (2)慢性乙型肝炎患者血清miR-210水平与ALT/AST水平及血清总胆红素水平呈正相关(P0.05),与凝血酶原活动度呈负相关(P0.05)。 3动物实验结果 (1)小鼠肝衰竭进程存在动态缺氧现象。Con A暴露6h组和12h组小鼠肝细胞缺氧率显著性增加(P0.05),Con A暴露24h组小鼠肝细胞缺氧率显著高于Oh组(P0.05),但低于6h和12h组(P0.05)。 (2)小鼠肝组织和血清miR-210表达水平随着病情进展显著升高。 (3)小鼠肝衰竭进程miR-210靶基因Iscu、Ndufa4、Sdhd、Gpd11和Cox10mRNA表达水平显著性减少(P0.05)。 4细胞实验结果 (1)缺氧条件下miR-210过表达抑制HepG2.2.15细胞线粒体脱氢酶活性。 (2)缺氧条件下miR-210过表达抑制HBV DNA复制和HBsAg表达。 研究结论 1.miRNA表达谱芯片结果显示：乙型肝炎重症化进程血清中miRNA的数量和表达水平与乙型肝炎病情严重程度有关。 2.肝炎病人调查显示：miR-210对乙型肝炎重症化进程有重要的提示作用,miR-210对乙型肝炎重症化的早期诊断有重要意义。 3.肝炎病人miR-210表达水平升高的内在机制是炎症导致肝细胞缺氧,进而诱导miR-210表达。 4.通过调节线粒体代谢,miR-210在乙型肝炎重症化进程中可能起着重要的保护作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 钟冬梅;;1例药物诱发重症乙型肝炎并发糖尿病的临床特点及护理[J];中国校医;2006年03期

2 林尔昕;;重症乙型肝炎的救治[J];安徽医学;1990年03期

3 俞峰;张娅珍;;解毒利湿活血退黄配合西药治疗重症淤胆型乙型肝炎黄疸疗效观察[J];中国乡村医药;2006年09期

4 ;乙型肝炎和肝硬化患者补体旁路溶血活性的观察[J];南京医科大学学报(自然科学版);1985年01期

5 荆庆;宋济洲;员学亮;;乙型肝炎e抗元阳性者的临床特征[J];临床医学;1980年04期

6 朱瑞芬 ;王裕民 ;孙树花 ;耿文谨 ;孙秉营 ;陈淑芹;;健脾益肾治疗乙型病毒性肝炎疗效观察[J];山东大学学报(医学版);1986年01期

7 严水生;;催化模型在乙型肝炎流行病学中的应用[J];江西医药;1987年02期

8 周文伟;;2名抗-HBe阳性男子的配偶连续发生暴发性乙型肝炎[J];国际流行病学传染病学杂志;1987年02期

9 朱和平;郭美香;谢力;吕有余;;253医院最近研制出ELISA检测HBsAg药盒[J];内蒙古医学杂志;1988年01期

10 李杰;;韶关市病毒性肝炎感染近况及乙型肝炎控制前景[J];华南预防医学;1990年04期

相关会议论文 前10条

1 齐兴军;姬宝印;于洪枢;;从业人员乙型肝炎感染状况调查[A];吉林省预防医学学术座谈会论文集[C];2004年

2 殷晓轩;孙世萍;;心理疗法在乙型肝炎治疗中的地位与应用[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年

3 黄灿华;;RUNX3基因在乙型肝炎病毒诱导肿瘤发生中的作用[A];2004年中国科学院新生病毒性疾病控制学术讨论会摘要集[C];2004年

4 林寿宁;黄彬;朱永苹;;壮肝逐瘀煎治疗乙型肝炎肝纤维化60例临床观察[A];第四次全国中西医结合养生学与康复医学学术研讨会论文集[C];2004年

5 邹金生;;乙型肝炎临床治疗的思考[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年

6 刘娅;张爱芸;袁迎春;席向红;赵经川;;性别因素在乙型肝炎及肝硬化中的作用[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年

7 郑玉清;包丽梅;;口腔科门诊乙型肝炎病人治疗过程中的护理体会[A];全国第六届口腔医院管理研讨会论文汇编[C];2000年

8 杨必金;;乙型肝炎的辨证施治[A];中国中医药学会建会20周年学术年会专辑(下)[C];1999年

9 宾学森;;呼吁重视对“乙型肝炎”的预防与控制[A];中国中西医结合学会第十三次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2001年

10 刘庆德;吴云南;;肺结核合并乙型肝炎临床分析[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年

相关重要报纸文章 前10条

1 记者 许晓岚;我区将对乙型肝炎流行病学展开调查[N];内蒙古日报(汉);2008年

2 上海市第六人民医院教授、主任医师 潘钰卿;乙型肝炎需早治[N];上海科技报;2000年

3 上海中医药大学 胡义扬;乙型肝炎如何预防[N];上海中医药报;2004年

4 市传染病医院副主任医师 周红燕;乙型肝炎能否彻底治愈？[N];无锡日报;2005年

5 郭新会 北京佑安医院 主任医师;直面乙型肝炎[N];中国劳动保障报;2009年

6 李赛玲;朱军;乙型肝炎辨治研究[N];中国医药报;2003年

7 本报记者 张雷 实习记者 陈丽莹;乙型肝炎携带病毒≠患病[N];医药经济报;2004年

8 刘士敬 博士;乙型肝炎为何多为慢性的[N];中国医药报;2000年

9 昌吉州人民医院传染病分院副院长 主治医师 巩维进;乙肝不可怕 治疗很重要[N];昌吉日报;2009年

10 孔明云;治疗乙型肝炎经验方七则[N];中国中医药报;2004年

相关博士学位论文 前10条

1 宋广忠;乙型肝炎重症化过程中microRNA-210的改变及功能研究[D];浙江大学;2013年

2 杨云;microRNA-210及其靶基因SIN3A在原发性肝细胞癌侵袭转移性中的功能机制研究[D];第二军医大学;2012年

3 邵中军;乙型肝炎病毒宫内感染危险因素研究[D];第四军医大学;2005年

4 周世水;重组人源抗HBsAg单链抗体—干扰素γ在巴氏毕赤酵母中表达的研究[D];华南理工大学;2003年

5 赫兢;治疗性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

6 郭明高;表面抗体基因在肝移植中抑制乙型肝炎病毒再感染的实验研究[D];第二军医大学;2005年

7 栗华;TGFβ1和血管紧张素系统基因多态性与乙肝肝硬化遗传易感性关系的相关性研究[D];山东大学;2005年

8 熊盛;重组人源抗HBsAg单链抗体在大肠杆菌和巴氏毕赤酵母中的表达、纯化与性质鉴定[D];华南理工大学;2002年

9 李玲;激活诱导细胞死亡在乙型肝炎发病机制中的意义[D];第三军医大学;2001年

10 李树龙;乙肝纤维化分期相关血浆标志物的定量蛋白质组研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年

相关硕士学位论文 前10条

1 马颖;阿德福韦酯片治疗慢性乙型病毒性肝炎的疗效和安全性研究的方案设计与实施阶段小结[D];四川大学;2005年

2 陈丽英;慢性丙型肝炎患者糖尿病并发率调查及其临床特征分析[D];吉林大学;2005年

3 石少媛;人类白细胞抗原-DRB1基因多态性与山西地区家族性乙肝的相关性研究[D];山西医科大学;2010年

4 张骏飞;拉米夫定治疗乙型肝炎肝衰竭的临床观察[D];安徽医科大学;2011年

5 曹宏;妊娠期乙型肝炎危险因素的探讨[D];天津医科大学;2003年

6 王秀娟;干扰素联合胸腺肽α1治疗免疫耐受期乙肝病毒携带者的实验研究[D];吉林大学;2005年

7 刘晓梅;胸腺肽α1抗乙型肝炎病毒作用的研究[D];吉林大学;2006年

8 何夏婷;高校学生乙型肝炎知识—态度—行为问卷的编制、评价以及应用[D];暨南大学;2010年

9 福军亮;乙型肝炎患者CD4～+CD25～+调节性T细胞特点和肝病进展相关性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年

10 谷军生;慢性病毒性乙型肝炎急性发作后体内免疫动力学研究[D];郑州大学;2005年

，

本文编号：2302726