混合抗原检测HIV抗体方法及CD4 C868T单核苷酸多态性与HIV-Ⅰ型易感性的研究

发布时间：2018-11-11 07:54

【摘要】：目的 1.以四种特异性多肽抗原HIV Gp41、Gp120、Gp36和p24蛋白为主要原料，调整各多肽抗原比例合适比例，以ELISA原理为基础，制备成检测HIV抗体试剂盒。 2.对自制试剂盒进行相关的性能验证。 3.研究CD4C868T单核苷酸多态性在广西HIV Ⅰ型感染人群中的分布状况，并分析广西人群CD4C868T单核苷酸多态性与HIV Ⅰ型易感性的相关性，为预防广西HIV Ⅰ型感染以及治疗提供理论基础。 方法 采用改良过碘酸钠氧化法制备酶标抗原，用包被缓冲液配制不同浓度的混合多肽抗原液，包被聚苯乙烯板孔，采用棋盘滴定法选择合适的抗原包被浓度及酶标抗原工作浓度，对检测系统进行固相抗原与抗体结合时间，酶结合物作用时间及显色时间进行优化，用优化后的方案对试剂盒进行相关的性能验证。选取HIV高发区广西的101例HIV Ⅰ型患者（艾滋病组）和102例健康体检者（对照组），采用聚合酶链反应（PCR）方法及DNA测序法，检测CD4基因C868T位点（rs28919570C/T）多态性，用χ2检验比较基因型和等位基因型分布频率在艾滋病组和对照组间的差异，logstic回归分析计算比值比（Oddsratios，OR）和95%可信区间（Confidence Intervals，CI），并以性别和年龄进行校正，对rs28919570C/T基因多态性和HIV Ⅰ患者的易感性进行关联分析。以上统计均采用SPSS16.0软件进行分析。基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻1140003A 1） 结果 1.经过棋盘滴定法选择，混合抗原的包被浓度为5ug/ml，酶标抗原最佳工作浓度为1:160。 2.经过对检测系统进行优化，，得出固相抗原与抗体结合作用时间为60min，酶结合物作用时间为45min，显色时间为15min；试剂盒的敏感性为97.2%，特异性为98.6%；试剂盒的主要活性成分在25℃室温放置一周及4℃条件下放置一个月或者三个月之后，质量未发生明显改变，试剂盒的稳定性良好。 3.艾滋病组和对照组在性别和年龄组成上的差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。艾滋病组和对照组rs28919570C/T位点基因型符合Hardy weinberg平衡，所检测的样本具有代表性和可比性。 4.本研究观察到rs28919570C/T位点共有CC、CT、TT三种基因型，三个基因型在广西人群HIV 1感染组和对照组中分布频率的差异无统计学意义（P＞0.05）。与CC基因型相比，CT基因型和HIV 1感染风险无相关性（P＞0.05），TT基因型和HIV 1感染风险无相关性（P＞0.05），尚不能认为CD4rs28919570C/T位点的基因多态性与广西人群HIV 1感染易感性有关。 5. rs28919570C/T位点三个基因频率在对照组中的分布与北京汉人、日本东京人和美国德克萨斯州休斯敦印第安人群的研究结果较类似，与美国西南部非洲人、尼日利亚伊巴丹的约鲁巴人的研究结果差异较大。 6.无论是在男性人群中还是在女性人群中，CD4rs28919570C/T位点的基因多态性与HIV 1感染风险无相关性（P＞0.05）。 结论 以人工合成多肽抗原混合包被聚苯乙烯板孔，检测HIV感染的方法具有可行性，对检测方案进行一系列优化后，试剂盒具有较高的检测敏感性和特异性。尚未发现CD4rs28919570C/T位点基因多态性与广西人群HIV 1感染风险具有相关性。
[Abstract]:Purpose 1. Using four specific polypeptide antigens, such as HIV Gp41, Gp120, Gp36 and p24 as the main raw materials, the appropriate proportion of each polypeptide antigen was adjusted, based on the ELISA principle, and prepared to test the HIV antibody test. reagent box. 2. Related to self-made kit 鐨勬

本文编号：2324237