雌激素受体α及其变异体在HBV相关肝病中的表达及意义

发布时间：2018-12-10 07:04

【摘要】：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一个严重公共卫生问题，对人类健康造成了极大的威胁。我国是原发性肝癌的高发国家，与欧洲国家引起肝癌的主要危险因素不同，我国原发性肝癌主要是由慢性HBV感染引起，HCC患者中约70%以上有HBV感染。同时，在HBV慢性感染者当中，重型乙型肝炎、肝硬化、肝癌的发病率呈现显著的性别差异，男女性别比约5-10:1。男性重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的预后较差、死亡率较高，女性肝癌患者无论是自然生存率还是切除术后生存率均高于男性。造成肝癌性别差异的因素一直以来被认为是揭示肝癌发病机制的关键。流行病学和实验证据表明，除了经典的乳腺癌和前列腺癌之外，肝癌也是性激素影响极其显著的肿瘤之一。大量的研究提示，雌激素与肝癌的发生发展有关。雌激素是通过与特异性的受体(雌激素受体)相结合而发挥作用的，雌激素受体(estrogen receptor，ER)主要有和β两种亚型。我们前期研究发现ER基因的29C-IVS1-401C单倍型不仅能够增加HBV感染清除还能降低HBV相关的肝硬化、肝癌的易感性，，提示ER与HBV感染疾病的进程有关。2012年台湾学者Wang等研究发现，ER可以通过与肝细胞核因子-4(hepatocyte nuclear factor-4，HNF-4)交互作用来抑制HBV基因的转录，进一步解释了HBV相关HCC男性多于女性的原因。 1998年Villa等首次报道：ER第5外显子缺失而产生的变异体(ER5)在HCC中也有表达，且ER5的表达与肝癌患者的预后相关。国内关于这方面的研究较少，特别是ER5蛋白在HCC组织中的表达情况目前尚无报道。因此，本研究拟采用免疫组织化学、RT-PCR及Western blot的方法来检测HBV相关肝病患者肝组织中ER及其变异体的mRNA和蛋白的表达及规律，以探讨ER及变异体在HBV相关肝病发生发展中的作用，以望对HBV相关肝病的内分泌治疗及预后判断提供依据。本研究分为三部分：第一部分以HBV相关HCC为研究对象，采用免疫组化及Western blot的方法研究野生型ER和ERβ在HBV相关HCC组织中的表达及规律，并分析ER、ERβ的表达与HCC患者临床病理特征的关系。第二部分以HBV相关HCC、癌旁及慢性乙型肝炎为研究对象，采用RT-PCR、TA克隆测序的方法研究ER及变异体在HBV相关HCC、癌旁及慢性乙型肝炎中的表达及规律，并确定变异体类型。第三部分在第二部分确定变异体类型的基础上，制作变异体特异性抗体，并以HBV相关肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎为研究对象，采用组织芯片免疫组化及Western blot的方法研究变异体ER5在HBV相关肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎中的表达规律，并分析ER5的表达与HBV相关HCC患者临床病理特征的关系。结果： 1.ER在HBV相关肝癌肝组织中主要表达定位于细胞浆，阳性表达率为35.7%。在肿瘤直径≤5cm和TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期患者的ER表达明显高于肿瘤直径＞5cm和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者(P值分别为0.006和0.011)，其表达与患者性别、年龄、血清中AFP水平、肿瘤分化程度及肿瘤结节多少差异无统计学意义(P＞0.05)。 2.ERβ在HBV相关肝癌肝组织中主要表达定位于细胞浆，其表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、肿瘤分化程度、结节多少及血清AFP水平差异均无统计学意义。 3.野生型ER mRNA在乙肝相关肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝组织中的表达率分别为100%、88.2%和77.8%，差异无统计学意义。 4.在乙肝相关肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝组织中有ER第五外显子缺失变异体ER5mRNA的表达，其表达率分别为76.5%、76.5%和38.9%，差异有统计学意义(χ2=7.169，P=0.025)。 5.组织芯片免疫组化提示ER5在肝癌、癌旁及正常肝组织中均定位于细胞浆，阳性表达率分别为67.2%、50%和25%，差异具有统计学意义(χ2=7.308，P=0.026)。 6.Western blot检测发现ER5蛋白在肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎组织阳性表达率分别为88.2%、76.5%和61.1%，差异无统计学意义(χ2=3.460，P=0.177)。结论： 1. ER和ERβ在慢性乙型肝炎、乙肝相关肝癌及癌旁组织中均有表达，且主要定位于细胞浆。 2. ER在HBV相关HCC中存在差异表达，在肿瘤直径≤5cm和TNM分期中Ⅰ～Ⅱ期患者的ER表达明显高于肿瘤直径＞5cm和TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的患者，提示ER表达随着肝癌的进展逐渐减弱。 3.在慢性乙型肝炎、HBV相关肝癌及癌旁组织中均有ER5的表达，也定位于细胞浆，且ER5mRNA及蛋白在HCC中的表达明显高于在慢性乙型肝炎或正常肝组织的表达，提示ER5可能与HBV相关肝癌的发生有关。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.62

【参考文献】