滤泡辅助性T细胞在慢性HBV感染中的初步研究

发布时间：2019-02-27 18:47

【摘要】：背景 HBV（Hepatitis B virus，HBV）的感染是一个波及全球的公共卫生问题，是造成肝脏急慢性损伤的主要原因。在我国，随着疫苗接种等预防措施的普及，HBV感染人群较前已有明显减少，但是人群的HBsAg阳性率仍达7.18%。许多研究表明，HBV引起肝脏损害的原因主要是病毒所触发的机体免疫应答所造成，，机体的CD8+T淋巴细胞、树突状细胞、调节性T淋巴细胞、自然杀伤性细胞等多种免疫细胞都参与疾病其中，交互成为网络，影响疾病的发展过程。在这个免疫网络中，滤泡辅助性T淋巴细胞（T follicular helper cells，Tfh）所发挥的作用在近年来引起了广泛的关注。滤泡辅助性T淋巴细胞主要存在于生发中心（germinal center，GC）中，在外周血循环系统中也有分布。Tfh细胞的主要作用是辅助B细胞增殖和发育，形成浆细胞或者是记忆B细胞，并进一步的辅助B细胞完成抗体分泌和型别转换。研究Tfh细胞在HBV感染后慢性乙型肝炎中发挥的作用，对于了解抗HBV特异性体液免疫机制具有重要意义。目的通过检测慢性HBV感染者外周血中的Tfh细胞的频数、相关功能分子和细胞因子的基因的表达情况。初步了解在慢性HBV感染过程中Tfh细胞所发挥的作用。方法 1、研究对象选择：选择两年内未进行抗病毒治疗的慢性HBV感染的患者，通过患者AST、ALT和HBV-DNA临床指标的区别将其分为免疫耐受组和免疫激活组。选择门诊健康体检者作为健康对照组。 2、流式细胞术检测三组人群外周血中的Tfh细胞（CD3+CD4+CXCR5+T）和B细胞（CD19+）频数，Tfh表面ICOS、PD1、CD40L分子的表达频数和B细胞表面ICOSL、PDL1、CD40分子的表达频数。 3、荧光定量PCR技术检测慢性HBV感染者Tfh细胞的特异性功能分子CXCR5、Bcl6和细胞因子IL-4、IL-21的mRNA的表达情况。 4、统计分析：数据采用SPSS18.0软件进行整理和分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差的形式表示，多组差异比较采用单因素方差分析，两组比较采用LSD-t检验，检验水准α=0.05。采用Pearson检验相关性分析，检验慢性HBV感染者外周血中Tfh细胞与B细胞频数的相关性和相关功能分子的表达频数的相关性，检验实验室指标与临床指标的相关性。结果 1、在外周血中，健康志愿者Tfh细胞频数为（15.47±8.72）%，免疫耐受者的Tfh细胞频数为（17.66±9.29）%，免疫激活者的Tfh细胞频数为（22.10±18.28）%。经统计分析三组间没有显著差异。 2、慢性HBV感染者外周血Tfh细胞上ICOS、PD1、CD40L分子的表达频数显著高于健康对照者，其中免疫耐受者和免疫激活者之间无显著差异；慢性HBV感染患者外周血B细胞上的ICOSL、PDL1、CD40分子的表达频数与健康对照组无显著差异。 3、慢性HBV感染者外周血的Tfh细胞的CXCR5、Bcl6、IL-4、IL-21mRNA的表达显著高于健康对照者。 4、慢性HBV感染者外周血的ICOS阳性的Tfh细胞与ICOSL阳性的B细胞频数呈正相关，PD1阳性的Tfh细胞与PDL1阳性的B细胞频数呈正相关。 5、慢性HBV感染者外周血中Tfh细胞的频数与ALT、AST呈正相关；CD40阳性的B细胞的频数与ALT，AST，HBV-DNA呈负相关。结论 1、慢性HBV感染者的Tfh细胞的数量并未发生显著改变，可能病毒的感染是影响了Tfh细胞功能的异常而致免疫失衡。 2、慢性HBV感染者外周血中ICOS，PD1，CD40L在Tfh细胞上的表达频数显著高于健康对照组，可能是由于Tfh细胞与B细胞之间的相互作用的信号发生改变，导致了Tfh细胞辅助B细胞增殖和分化的作用的发生异常，外周循环中保护性抗体的分泌缺失，从而介导了HBV的持续感染。 3、慢性HBV感染者的Tfh细胞特异性功能分子Bcl6、CXCR5和细胞因子IL-4、IL-21的mRNA的表达上调，提示Tfh细胞相关的基因的活化紊乱可能参与了慢性乙型肝炎的发病过程。 4、慢性HBV感染者Tfh细胞的频数与ALT，AST呈正相关，说明Tfh细胞参与了肝脏的损伤过程，可用作慢性HBV感染后肝脏炎症程度的免疫预警指标。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62

【共引文献】