PPARγ激动剂抑制HIV-1 Tat诱导的黏附分子促炎反应的实验研究

发布时间：2019-03-04 10:06

【摘要】：第一部分人脑微血管内皮细胞培养、细胞生长特性及HIV-1Tat对细胞活性影响的初步研究【目的】探索适宜人脑微血管内皮细胞（human cerebral microvascularendothelial cells,hCMEC/D3）生长的培养体系，明确细胞生长特性，了解人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子（HIV-1transactivator oftranscription,HIV-1Tat）对细胞活性影响，，为后续研究奠定基础。【方法】以添加碱性成纤维细胞生长因子、氢化可的松、抗坏血酸、脂质浓缩物、青链霉素及胎牛血清等成分的EBM-2完全培养液进行细胞培养并传代扩增，倒置相差显微镜观察细胞生长形态特征，绘制细胞生长曲线；采用MTT法检测HIV-1Tat对hCMEC/D3细胞活性的影响。【结果】细胞传代后生长能力强，性状稳定，明确细胞生长规律；浓度梯度的HIV-1Tat250ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml处理细胞24h后细胞存活率分别为97.60%、91.57%和87.15%；1000ng/ml HIV-1Tat处理细胞6h、12h、18h和24h后细胞存活率分别为96.86%、92.31%、88.06%和86.79%。【结论】成功构建适宜hCMEC/D3生长的培养体系，细胞生长状态良好；MTT结果表明当处理hCMEC/D3的HIV-1Tat浓度"f1000ng/ml，作用时间"f24h时，对细胞活性无明显影响。第二部分PPARγ激动剂对HIV-1Tat诱导的黏附分子蛋白表达的影响【目的】探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ （peroxisomeproliferator-activated receptor gamma,PPARγ）激动剂罗格列酮对HIV-1Tat诱导的hCMEC/D3中细胞间黏附分子-1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesionmolecule-1,VCAM-1)蛋白表达的影响。【方法】将hCMEC/D3分为四组进行处理，12h后收集细胞总蛋白，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组hCMEC/D3中ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达。【结果】 HIV-1Tat上调hCMEC/D3中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达（P㩳0.05和P0.01），PPARγ激动剂罗格列酮抑制HIV-1Tat诱导的ICAM-1蛋白表达（P㩳0.05），对HIV-1Tat诱导的VCAM-1蛋白表达下调作用则较弱（P0.05）。【结论】PPARγ激动剂罗格列酮可在一定程度上抑制HIV-1Tat诱导的黏附分子表达增加。第三部分PPARγ激动剂对HIV-1Tat诱导的黏附分子mRNA表达影响及机制研究【目的】探讨PPARγ激动剂罗格列酮对HIV-1Tat诱导的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达影响及可能的作用机制。【方法】将hCMEC/D3分为八组进行处理，6h后提取细胞总RNA，实时反转录聚合酶链式反应（Real-time RT-PCR）法检测ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达；将hCMEC/D3分为四组进行处理，1h后收集细胞总蛋白，Western blot法检测hCMEC/D3中Akt的蛋白表达。【结果】 HIV-1Tat上调ICAM-1和VCAM-1的mRNA表达（均P0.001），PPARγ激动剂罗格列酮抑制HIV-1Tat诱导的ICAM-1、VCAM-1的mRNA表达（均P0.01），这种抑制作用可被PPARγ拮抗剂GW9662（均P0.01）和Akt信号转导通路抑制剂KP3721逆转（均P0.01）；HIV-1Tat处理后的hCMEC/D3磷酸化Akt（p-Akt）水平显著上调（P㩳0.01），PPARγ激动剂罗格列酮显著抑制HIV-1Tat诱导的Akt磷酸化反应（P㩳0.01）。【结论】PPARγ激动剂罗格列酮通过Akt信号转导通路抑制HIV-1Tat诱导的黏附分子ICAM-1、VCAM-1促炎反应。
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【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.91

【参考文献】