乙型肝炎病毒编码蛋白HBx对人KCTD9基因的激活作用研究

发布时间：2019-03-22 10:59

【摘要】：重型肝炎是一种预后很差的疾病，我国以乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus）所致的重型肝炎为主（约占70%）。HBV所致重型肝炎的发病机制十分复杂。目前研究认为，重型肝炎发生发展的 启动或制控点‖受病毒和宿主两个方面的因素以及这两方面相互作用的影响。就乙型肝炎病毒自身因素方面而言，乙型肝炎病毒编码的病毒蛋白被认为在HBV相关的肝脏疾病的发生发展过程中有着相当重要的作用，，并且可以调节机体内各类分子的表达以及影响着HBV的整个复制过程等[1-3]。 人KCTD9基因位于人第8号染色体,其编码蛋白属于KCTD家族的一员。本实验室通过基因芯片对比重型乙型肝炎与慢性乙型肝炎轻度患者外周血单个核细胞(PBMC)的基因水平表达差异，发现重型乙型肝炎患者PBMC中KCTD9mRNA水平大大高于慢性乙型肝炎轻度患者[4-7]。 为探讨HBV编码蛋白是否对人KCTD9具有激活作用，设计了下列试验。最先我们探讨乙型肝炎病毒编码蛋白能否对人KCTD9基因有着明显的调控作用。构建三种HBV编码蛋白HBc、 HBs和HBx的真核表达质粒pcDNA-HBc、pcDNA-HBs和pcDNA-HBx以及hKCTD9启动子荧光素酶报告基因质粒，把病毒蛋白表达质粒与启动子质粒以及β半乳糖苷酶基因表达质粒（β-Gal）共转染到CHO细胞系，研究HBV编码蛋白是否对人KCTD9(hKCTD9)基因具有激活作用，并且明确何种病毒蛋白发挥活化基因的作用。通过检测报告基因相对荧光素酶（Luciferase）值反映乙型肝炎病毒编码蛋白对hKCTD9基因的转录具有明显激活作用，实验结果表明，HBV编码的HBx蛋白能够明显激活hKCTD9基因启动子的转录。 在HBV编码HBx蛋白作用下，为研究参与激活hKCTD9基因的顺式作用元件，接下来做了一系列基因启动子的截短缺失试验，成功构建了一系列5‘端缺失、拥有同样3‘端的hKCTD9基因启动子荧光素酶报告质粒，把上述质粒分别与乙型肝炎病毒编码的HBx蛋白真核表达质粒同时共转染进HepG2肝癌细胞中。研究结果显示：在hKCTD9基因上游启动子的-751位至-657位（相对于转录起始点）之间可能存在着重要的调控序列。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 徐莉;杨道锋;陈韬;苏凯;宁琴;;利用昆虫杆状病毒表达系统表达人KCTD9蛋白[J];实用肝脏病杂志;2010年04期

2 周耀勇;皮斌;刘小娟;韩梅芳;严伟明;习东;宁琴;;KCTD9多肽抗体的制备和应用[J];中国免疫学杂志;2009年03期

相关博士学位论文 前2条

1 李维娜;乙型肝炎病毒编码蛋白对宿主炎性基因的调控作用及其机制研究[D];华中科技大学;2011年

2 韩梅芳;HBV编码蛋白通过转录因子c-Ets-2激活人纤维介素基因hfgl2的作用机制研究[D];华中科技大学;2007年

本文编号：2445530