布鲁氏菌MLVA分子流行病学特征及体外药敏研究

发布时间：2019-04-26 14:54

【摘要】：目的收集中国各省、自治区及直辖市布鲁氏菌生物分型和MLVA分型的数据进行统计分析,发现型别分布在布鲁氏菌病防控各个阶段的特点。对青海省分离的布鲁氏菌株进行生物种型和MLVA基因分型分析,同时与全国的布鲁氏菌株信息比对。建立全国布鲁氏菌的生物种型和MLVA分型的数据库,为应用分子流行病学防控布鲁氏菌病提供科学依据。比较MH(Mueller-HintonA)琼脂平皿、MH(Mueller-HintonA)琼脂血平皿和布氏琼脂平皿三种培养基在做布鲁氏菌药敏试验的优缺点,筛选最适宜的布鲁氏菌药敏试验培养基。选择全国各地180株布鲁氏菌进行体外药敏实验,选择多西环素(DOS)、利福平(RD)、链霉素(S)、左氧氟沙星(LEV)、莫西沙星(MXF)、复方新诺明(SXT)、头孢曲松钠(CRO)和阿莫西林/克拉维酸(AMC)等八种《布病诊疗指南》中常用的布病治疗用药和新型的抗生素,探索布鲁氏菌耐药性。分析我国高流行区和散发区分离的布鲁氏菌对八种抗生素的药敏差异,以期指导布鲁氏菌病在临床的治疗及合理规范的用药。方法:按“布鲁氏菌病/布鲁氏菌”、“生物分型、鉴定”和“多位点数目可变串联重复序列分析/MLVA”关键词组合,在NCBI(美国国立生物技术信息中心)网站、万方数据库、中国知网、中文期刊数据库(维普)等数据库中检索近几年间有关布鲁氏菌MLVA分型的核心期刊文献,收集中国各省、区及直辖市布鲁氏菌MLVA分型的数据。对各实验及文献检测样本的布鲁氏菌株数量,生物型别、分离宿主、时间、地方以及MLVA panel 1和panel 2的16个VNTR位点重复数结果,检测的样本数量进行统计分析。采用K-B药敏纸片法,按美国临床试验标准研究所CLSI/NCCLS 1999-2005年颁布的药敏实验标准,对利福平(RD)、左氧氟沙星(LEV)、莫西沙星(MXF)、链霉素(S)、复方新诺明(SXT)、头孢曲松钠(CRO)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)和多西环素(DOS)等八种抗生素进行药敏实验。观察抗菌药物纸片有无抑菌环,量取其直径大小,用“mmm”数记录结果。结果:1.共检索到相关布鲁氏菌生物和基因分型的的文献131篇。筛选得到有具体明确数据的布鲁氏菌生物和基因分型的文献共52篇。2.收集到31个省、自治区和直辖市的1643株布鲁氏菌的生物型别、分离宿主、时间、地方以及MLVA panel 1和panel 2的16个VNTR位点重复数的数据。3.按照生物型进行分类,羊种占73.82%,牛种占15.16%,猪种占6.88%,犬种占4.14%。羊种布鲁氏菌中,羊种1型占羊种的6.35%;羊种2型占羊种的4.62%;羊种3型占羊种的 89.0%。4、按照MLVA-8分型,羊种基因型主要以42、43型为主,属东地中海型。5、在山西、内蒙古、新疆、宁夏、青海历史上或现在布鲁氏菌病疫情严重的地区和南方的广东、海南、福建等省份,MLVA8分型的基因型较多,有42、43、63、114、58、112、47、45和96等基因型,呈现基因型别的多样性。6、青海省布鲁氏菌分为3个种(羊种、牛种、猪种)和6个生物型(羊种1型、2型、3型;牛种3型、7型;猪种1型)。羊种布鲁氏菌占91.38%、牛种布鲁氏菌占6.90%、猪种布鲁氏菌占1.72%。羊种菌的3个生物型青海省均有,以羊3型为主要的优势种型。7、青海省布鲁氏菌被分为3个种群7个集群(A～G群)40个基因型,按照MLVA8分型有42型、43型、47型、28型、63型、36型、112型、6型,以42型和43型为主。8、MH琼脂平皿和MH琼脂血平皿不适宜布鲁氏菌生长。9、在布鲁氏菌药敏实验中布鲁氏菌对链霉素、多西环素、阿莫西林/克拉维酸、左氧沙星、头孢三嗪、利福平和莫西沙星等常用的一线抗生素均敏感,未出现耐药现象。10、39%的布鲁氏菌菌株(70株/180株)对复方新诺明有耐药性,几乎每个省均有复方新诺明有耐药性布鲁氏菌株的分布。结论:1、分离的布鲁氏菌种、型在我国北方、南方省份分布特点不明显,均分离到有羊种、牛种布鲁氏菌和犬种布鲁氏菌。但是猪种布鲁氏菌以南方分离的省份较多。2、全国各省份MLVA分型主要以42和43为主,传统的布鲁氏菌病老疫区、现阶段布鲁氏菌病疫情高发流行省份如山西、内蒙、新疆、宁夏、青海、广东和海南,MLVA-8的基因型别较为丰富多样,基因呈多态性分布。3、青海存在着自然疫源地疫情的复燃和外来输入性传播的内外双重风险的夹击,布病的防控难度极大。4、作为自然疫源地地存在着多条直接或间接的传播途径,家畜→人,野生动物→人,野生动物←→家畜→人,野生动物←→家畜,输入性传播等。5、青海同全国相比也是以羊种布鲁氏菌为主,主要有羊种3型,同时也有牛种(3型、7型)和猪种(1型),布鲁氏菌生物种型呈多样性。6、青海的羊种型布鲁氏菌大部分较为集中在一个群集中,各型之间相互比对差别非常小,只有一到两个重复序列的区别,同其他省份在panel 2B有明显的差异,有多个重复序列的区别。7、青海布鲁氏菌株中有9个基因型与黑龙江、山西、广东、内蒙古、河北、河南、陕西、江西、新疆和重庆等省份的菌株基因型完全一致,为共享基因型。8、布鲁氏琼脂适用于布鲁氏菌药敏实验,可以作为布鲁氏菌药敏实验的培养基平皿。9、《布病诊疗指南》的临床用药中,复方新诺明有耐药现象产生。10、25个省检出对复方新诺明耐药性布鲁氏菌株,南北方分布未见差异,对复方新诺明有耐药性布鲁氏菌株占到39%(70/180)。11、建议布菌患者临床用药应结合药敏试验结果研究和观察效果。
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【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R516.7

【参考文献】