乙型肝炎肝硬化患者FoxP~3 mRNA表达及血清IL-12、IL-18水平的变化

发布时间：2020-02-09 08:22

【摘要】：目的：慢性乙型肝炎病毒感染的发病机制与机体免疫反应关系密切，近年来关于CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞在HBV感染者中的功能和作用，日益成为研究的焦点。明确Treg细胞对效应T细胞及相关细胞因子的免疫耐受状态的调控机理，对于有效终止病毒持续感染具有重要意义。FoxP~3是目前公认的CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞的最具特异性的转录因子，通过检测FoxP~3mRNA的表达情况，可准确反映CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞的活性水平。本实验旨在初步探讨慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者FoxP~3mRNA表达及血清中IL-12、IL-18水平变化及其意义，，并分析外周血FoxP~3mRNA表达与血清IL-12、IL-18水平的相关关系，以及外周血FoxP~3mRNA表达、血清IL-12、IL-18水平与病毒载量的相关关系。方法：1.提取健康对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组新鲜血液中的总RNA，逆转录成cDNA；实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）扩增检测健康对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组FoxP~3mRNA的表达水平，并分析外周血FoxP~3mRNA表达与病毒载量的相关关系。2.采用ELISA方法测定健康对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组血清的IL-12、IL-18水平，并分析血清IL-12、IL-18水平与病毒载量的相关关系。3.分析健康对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝硬化组三组研究对象FoxP~3mRNA表达及IL-12、 IL-18水平的变化及其相关关系。4.分别测定并分析健康对照组、慢性乙型肝炎组、乙型肝炎肝炎肝硬化组的血清学指标，包括ALT、AST、ALB、PTA、HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、HBV-DNA定量。结果：1.慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化组的FoxP~3mRNA表达及IL-12、 IL-18水平，和正常健康组比较明显升高，差异有统计学意义（P0.05）；2.进一步两两比较：健康对照组与乙型肝炎肝硬化组、健康对照组与慢性乙型肝炎组组间FoxP~3的Mann-Whitney U值为0.000，两组间有统计学差异（p=0.000，P0.05）；慢性乙型肝炎与乙型肝炎肝硬化组组间：Mann-Whitney U值为225.500，两组间无统计学差异（p=0.189，p0.05）；健康对照组与乙型肝炎肝硬化组IL-12的Mann-Whitney U值为24.000，差异有统计学差异（p=0.000，p＜0.05）；健康对照组与慢性乙型肝炎组Mann-Whitney U值为12.000，（p=0.000，p＜0.05）组间有统计学差异；慢性乙型肝炎与乙型肝炎肝硬化组间：Mann-Whitney U值为264.000，两组无统计学差异（p=0.597，p0.05）；健康对照组与乙型肝炎肝硬化组IL-18的Mann-Whitney U值为7.000，组间有统计学差异（p=0.000，p＜0.05）；健康对照组与慢性乙型肝炎组：Mann-Whitney U值为36.000，组间有统计学意义（p=0.025，p＜0.05）；慢性乙型肝炎与乙型肝炎肝硬化组：Mann-Whitney U值为223.000，两组无统计学差异（p=0.173，p0.05）。3.采用Spearman相关系数方法对慢性乙型肝炎感染者FoxP~3mRNA与IL-12、IL-18水平作相关性分析，FoxP~3mRNA与IL-12(r=-0.297，P=0.059)，两者水平无相关关系；FoxP~3mRNA与IL-18(r=-0.242，P=0.078)，两者水平无相关关系；4.采用Spearman相关系数方法对慢性乙型肝炎感染者IL-12与IL-18作相关性分析(r=0.828，p=0.000)，两者之间呈正相关关系。5.采用Spearman相关系数方法对慢性乙型肝炎感染者病毒载量与FoxP~3mRNA水平作相关性分析：HBV-DNA与FoxP~3mRNA (r=0.830，P=0.031)，两者之间呈正相关关系；采用Spearman相关系数方法对慢性乙型肝炎感染者病毒载量与血清IL-12、IL-18水平作相关性分析：HBV-DNA与IL-12(r=-0.459， P=0.000)、 HBV-DNA与IL-18(r=-0.328， P=0.015)，HBV-DNA与IL-12和IL-18两者水平为负相关关系，即随着IL-12、IL-18的升高HBV-DNA呈现下降的趋势。结论：1.本实验发现,慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者外周血FoxP~3mRNA表达高于健康对照组(P0.05),并且与HBV-DNA载量呈正相关关系，表明FoxP~3mRNA的异常升高(即CD_4~+CD_(25)~+Treg细胞活性增强)抑制了效应性T细胞免疫反应，导致机体的免疫应答能力下降产生免疫耐受,使HBV不能被有效清除引起持续的感染，促使疾病向慢性化方向发展，其机制可能为慢性病毒性肝炎患者体内的炎性反应，产生一些细胞因子刺激Treg细胞的增生而引起FoxP~3mRNA的表达异常。2.慢性乙肝患者血清细胞因子IL-12、IL-18的异常升高可能是Th1/Th2细胞失平衡的结果,在乙型肝炎慢性化的进程中发挥作用，参与了病毒性肝炎肝炎肝硬化患者的肝脏炎性损伤的过程。3.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化患者中病毒载量与血清中细胞因子IL-12、IL-18为负相关关系，表现为随着血清中细胞因子IL-12、IL-18的升高出现病毒载量的下降。由于细胞免疫的增强，有利于病毒的清除，与此同时由于Th1细胞占优势,增强了CD+8T细胞的活性,也会进一步加重肝细胞的损伤；由此可见IL-12、IL-18参与了机体对HBV的免疫清除过程。4.本研究发现，外周血FoxP~3mRNA与血清IL-12、IL-18之间并没有相关关系。因此关于FoxP~3与细胞因子IL-12、IL-18的关系还有待进一步更深入的研究。
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62;R575.2

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本文编号：2577759