DHX15在HBV复制中的意义及其机制初步研究

发布时间：2020-03-23 15:05

【摘要】：目的:筛选DEx D/H-box家族中可能影响HBV增强子或核心启动子转录活性的基因,初步研究DHX15对HBV复制的调控作用。方法:1.克隆DEx D/H-box家族基因到表达质粒PCH9,并构建由HBV增强子和核心启动子驱动的海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc;2.分别将各种DDX表达质粒与pcore-Rluc共转染Hep G2细胞,筛选影响Rluc荧光素酶活性的DDX家族成员。3.在HepG2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒和DHX15表达质粒,通过Western blot检测DHX15在细胞中的表达,用Southern blot、Northern blot检测过表达DHX15对中HBV复制水平和转录水平的影响;4.构建HBV增强子与核心启动子截短突变体,确定DHX15在HBV增强子或核心启动子上的作用区域。结果:1.成功构建30种DEx D/H-box家族基因克隆;2.筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因DHX15(P=0.042);3.与对照组相比,过表达DHX15能促进HBV DNA的复制水平;并且能上调HBV RNA转录水平;4.成功构建HBV核心启动子截短突变体,发现DHX15促进HBV的复制是通过增强子实现的(t=8.292,P=0.0012;t=5.215,P=0.0064)。结论:过表达DHX15可通过影响HBV增强子的活性从而促进HBV复制。
【图文】：

HBV 增强子/核心启动子活性的 DEx D/H-box RNA 解旋酶HBV 核心启动子活性相对较弱，而海肾荧光素酶（Renilla Lucif灵敏度高的优点，所以我们选用海肾荧光素酶为报告基因。利用 增强子/核心启动子报告质粒，我们进行了荧光素酶筛选实验，以子/核心启动子活性有明显影响的DEx D/H-box家族基因。从筛选结可以看出：DDX18、DDX19B、DDX39A、DDX39B、DDX55 和 有较显著的正向调控作用，使海肾荧光素酶活性升高 2 倍以上，作用最为显著，与对照相比，使 Rluc 活性升高 3 倍以上，用 BonP 值后得到 P=0.042，差异具有统计学意义，因此我们首先对 DH究。

图 3 DHX15 过表达在 HepG2 细胞中可促进 HBV 复制re 3 DHX15 promoted HBV DNAreplication in HepG HepG2 细胞中过表达增强 HBV RNA 转录了 DHX15 对 HBV DNA 复制具有正向调控作过增强 HBV RNA 转录水平所引起的，我们又质粒和空载体与 HBV1.3 共同转染，转染后收orthern blot 检测。结果（图 4）显示，在 HeBV mRNA 水平升高，提示 DHX15 可以上调 H
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R512.62

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本文编号：2596895