柯里拉京抑制IL-13激活M2巨噬细胞介导血吸虫病肝纤维化的机制研究

发布时间：2020-04-03 21:20

【摘要】：目的:IL-13通过与IL-13Rα1受体相结合激活下游IL-13/STAT6信号通路,刺激巨噬细胞启动替代活化途径活化(M2型巨噬细胞),促进促纤维化分子的表达,在组织纤维化(特别是血吸虫病肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化等)中发挥关键作用。本研究旨在研究柯里拉京通过抑制巨噬细胞中IL-13/STAT6信号通路及其替代活化,抑制血吸虫病肝纤维化的作用及作用机制。方法:在本研究中,我们选择小鼠巨噬细胞系Ana-1作为细胞模型;血吸虫尾蚴感染C57BL/6小鼠,并用吡喹酮杀死成虫,制作虫卵诱导血吸虫病肝纤维化的动物模型。在细胞实验中,使用IL-13刺激后给予柯里拉京干预;动物实验中,吡喹酮有效杀死成虫后使用柯里拉京干预。随后通过real-time qPCR、ELISA、Western Blot等实验技术成功测定了IL-13Rα1,PPARγ,KLF4,SOCS1,STAT6,p-STAT6和TGF-β等M2型细胞因子的mRNA和蛋白表达,并制作组织切片,通过HE和Masson染色以及免疫组化,观察小鼠肝脏虫卵肉芽肿结节和纤维化程度。结果:相比造模组,柯里拉京干预组的PPARγ,KLF4,SOCS1,p-STAT6和TGF-β的表达量皆显著降低(p0.01或p0.05),表明柯里拉京对IL-13/STAT6信号通路有显著的抑制作用。同时,柯里拉京的这种抑制作用显示出显著的剂量依赖性(p0.05)。此外,在细胞实验中,即使当IL-13Rα1表达量被上调或下调时,柯里拉京的这种抗纤维化作用依旧存在。同时,HE染色、Masson染色及肝脏组织切片免疫组化显示柯里拉京干预组小鼠的肝纤维化程度和M2巨噬细胞分布明显低于模型组(p0.05),可以控制纤维化进展。结论:综上,柯里拉京可以通过抑制IL-13/STAT6信号通路诱导的M2巨噬细胞极化来减缓纤维化进程,为血吸虫病肝纤维化提供了一种新的可能治疗思路。
【图文】：

细胞活性,浓度,毒性,细胞的

华中科技大学博士学位论文实验结果柯里拉京对 Ana-1 细胞的毒性检测为了研究柯里拉京对Ana-1细胞的毒性，我们用CCK8实验检测了柯里拉京对a-1细胞活性的影响。通过对不同浓度柯里拉京对Ana-1细胞活性的影响的分析现，在各实验浓度下，柯里拉京处理24小时后，柯里拉京处理组的细胞活性于空白对照组（柯里拉京浓度为0）（p<0.05，Student’s t-test，n=3），且随着浓度增高，细胞活性逐渐降低。并当柯里拉京浓度为50、100、200、400μg/m间的活性有显著性差异（p < 0.05, one-way ANOVA, post-hoc: S-N-K method,对细胞的毒性呈现出较为明显的剂量依赖性。在本实验中，我们选取了细胞0%以上的三个浓度（100、50、25μg/ml）作为后续实验中柯里拉京的作用浓

慢病毒,转染,表面

27图 4：慢病毒转染上调 Ana-1 细胞表面 IL-13Rα1。Ana-1 细胞与慢病毒或空白载体共同培养96 小时后，，检测 IL-13 Rα1 的转录及翻译水平。（A）转染 96 小时后，在荧光显微镜下分别在荧光、普通光、荧光+普通光三种条件下观察 Ana-1 被转染效率，显示细胞已被转染成功。（B）实时 qPCR 检测转染后 IL-13Rα1 mRNA 表达量变化。*p<0.01，与空转组或空白对照组相比（Student’s t-test, n=3）。（C）Western Blot 检测转染后 IL-13Rα1 蛋白表达量变化。*p<0.01，与空转组或空白对照组相比（Student’s t-test, n=3）。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R532.21;R575.2

【相似文献】