结核分枝杆菌耐氯法齐明相关基因的临床研究

发布时间：2020-04-16 02:56

【摘要】：目的:了解结核分枝杆菌耐氯法齐明基因的临床现状,为制定含氯法齐明的耐药结核病治疗方案提供实验室依据。方法:收集于我院门诊、住院肺结核患者痰液标本,进行涂片抗酸染色和结核分枝杆菌培养、菌型鉴定及药物敏感试验(包括一线和二线抗结核药物),筛选结核分枝杆菌临床株,提取结核分枝杆菌DNA,然后利用聚合酶链式反应扩增氯法齐明耐药基因(Rv0678,Rv2535c,Rv1979c)全长,进行基因测序得出结核分枝杆菌耐药基因型结果。最后用基因测序结果和结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因序列与美国国立生物技术信息中心进行对比,进一步分析结果。结果:获得结核分枝杆菌临床株共121株(60例敏感结核分枝杆菌、5例单耐药结核分枝杆菌、5例多耐药结核分枝杆菌以及51例耐多药结核分枝杆菌),并检测3个氯法齐明耐药基因:Rv2535c、Rv1979c和Rv0678。在敏感菌株中未检测到氯法齐明耐药基因突变,突变率为0%(0/60)。在单耐药及多耐药菌株中未检测氯法齐明耐药基因突变,突变率为0%(0/5)。在耐多药株中检测到2株Rv0678基因突变(GCC153GTC,ATG146AGG),突变率为3.9%(2/51);检测到2株Rv2535c基因突变(ACC56GCC,TTG121GTG),突变率为3.9%(2/51);未检测到Rv1979c突变。结核分枝杆菌临床株耐氯法齐明基因Rv0678和Rv2535c总基因突变率均为1.7%(2/121)。结论:耐药结核病中存在氯法齐明耐药基因的突变,存在氯法齐明耐药的风险,因此在拟定含氯法齐明抗结核化疗方案中应考虑到耐药基因突变,为降低耐药的风险,在用药前进行氯法齐明药敏试验及耐药基因检测是有必要的,同时本研究发现的耐氯法齐明的4个新型突变,为进一步研究氯法齐明的耐药机制奠定了实验室基础。
【图文】：

遵义医科大学硕士学位论文 图 1 ND-1000 检测结核分枝杆菌 DNA 浓度2.4 PCR 扩增结核分枝杆菌 Rv0678、Rv2535c(PepQ)、RV1979c得结果2.4.1 PCR 扩增结核分枝杆菌 Rv0678 基因所得产物凝胶结果121 例结核分枝杆菌菌株均成功扩增 Rv0678 基因，其 PCR 产物经 2 %琼胶电泳检测后于相应位置出现目的条带（图 2 所示）。

遵义医科大学硕士学位论文 刘图 3 结核分枝杆菌临床分离株 Rv2535c 基因全长 PCR 产物凝胶图注： 0.8%琼脂糖凝胶 M：2000bp Marker1-5：结核分枝杆菌临床分离株2.4.3 PCR 扩增结核分枝杆菌 Rv1979c 基因所得产物凝胶结果121 例结核分枝杆菌菌株均成功扩增 Rv1979c 基因，，其 PCR 产物经 2 %琼凝胶电泳检测后于相应位置出现目的条带（图 4）。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R52

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本文编号：2629311