HCV感染特征及NF-κB基因多态性与高危人群HCV易感性及感染转归的相关性研究

发布时间：2020-04-29 02:43

【摘要】：第一部分丙型肝炎的相关生化特征分析【背景】丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种血源传播病毒,感染人体后可引发丙型病毒性肝炎,并且极易发展为慢性感染状态,进而进展为肝硬化、肝癌等终末期肝脏疾病。HCV不仅侵害肝脏组织,也会侵害全身其他器官和免疫系统。丙型肝炎是一种免疫相关疾病,感染HCV后涉及到身体多个系统的不同反应。众多研究发现HCV不仅具有嗜肝性,在肝细胞中复制和繁殖,也可在外周血细胞、肾脏和骨髓中复制,而且也具有一定的淋巴细胞嗜性。感染HCV后,患者的白细胞计数、分类、血小板计数以及血液生化指标都会发生变化,因此,了解HCV患者肝功能相关指标及HCV感染后不同结局的生化特征,对评估疾病进展和患者预后有重要意义。【目的】筛选肝功能相关的生化指标以及比较感染HCV后的不同结局的患者的生理状态,旨在发现最适合反映丙肝感染状况的生化指标。【方法】采用流行病学调查收集130例HCV自限清除者,173例持续感染者的相关信息。并采集每位调查对象的清晨空腹10mL静脉血,运用相应的仪器检测血常规、肝功能、凝血功能和甲状腺功能。偏相关分析肝功能的相关生化指标以及与HCV感染状态的关系。【结果】调整年龄性别后的偏相关分析表明,淋巴细胞计数(LYMPH)、单核细胞(MONO)、凝血酶原时间(PT)和ALT、AST之间存在正相关关系。HCV不同感染结局的血常规、肝功能和凝血功能之间存在显著差异。纳入年龄、性别和以上在不同结局组分布有差异的生化指标进行逐步回归分析,结果表明ALT、ADA和HCV载量之间存在正相关性(P=0.008,P=0.032)。【结论】LYMPH、MONO和PT是与肝功能相关的生化指标,HCV自限清除组和HCV持续感染组在血常规、肝功能和凝血功能之间存在多项指标差异。而ALT、ADA水平和HCV载量呈正相关关系。第二部分我国高危人群NF-κB基因多态性与HCV易感性及感染转归的相关性研究【背景】据估计,世界范围内有1亿8500万多人感染丙型肝炎病毒(HCV)。在中国,HCV的感染者约占总人口的1.6%。超过70%的HCV感染者无法自发清除病毒,进而会发展为慢性丙型肝炎(CHC)、肝硬化和原发性肝细胞肝癌。感染HCV后的多种转归结局是机体遗传因素和病毒因素综合作用的结果。NF-κB在初始免疫和获得性免疫中都发挥着必不可少的作用,NF-κB可被一系列的刺激物激活,如细菌、病毒等抗原、细胞因子和氧化应激,相应的引发众多炎症调节因子的转录和激活。因而,NF-κB信号途径基因的异常活化和异常调节可导致某些自身免疫性疾病、炎症和恶性肿瘤发生。此外,NF-κB信号通路也可通过双向调节参与某些感染中的病毒逃逸和灭活。NF-κB信号通路基因的单核苷酸多态性(SNPs)和众多疾病之间存在显著的相关性。基于上述NF-κB在宿主免疫反应中的抗感染作用,因此,NF-κB信号通路基因变异可能会影响HCV的感染进程和预后。【目的】探讨NF-κB信号通路基因变异在HCV的感染进程和预后中的可能的作用。【方法】采用病例对照研究方案,纳入2581例HCV感染高危人群,运用多因素Logistic回归模型分析NF-κB信号通路基因上的4个多态性位点(rs230530、rs3774963、rs1056890和rs11820062)与HCV易感性和感染转归之间的关联性。并采用三种模型(相加模型、显性模型和隐性模型),分析每个SNP位点和HCV易感性和感染转归之间的关系。【结果】调整年龄、性别和感染途径后,Logistic回归分析显示,携带rs11820062 TT基因型的个体感染HCV的风险显著增高(P=0.002)。在相加和显性模型中,rs11820062 T等位基因和HCV感染易感性的关系仍具有统计学意义(P=0.002,P=0.003)。在显性模型中,rs230530 C等位基因在对照组和HCV感染组之间的分布具有显著差异(P=0.005)。采用Cochran-Armitage趋势性检验对rs11820062 T等位基因和rs230530 C等位基因对HCV易感性的累积效应进行分析,结果显示携带越多危险等位基因的个体,感染HCV的风险也越高,携带3种危险等位基因拥有最高的患病风险(调整OR=1.894,95%CI=1.230-2.758)。【结论】NF-κB信号通路基因遗传变异与中国高危人群感染HCV易感性相关,rs11820062 T、rs230530 C等位基因显著提高了HCV的感染风险。
【图文】：

潜在功能,意义

图 2 Regulome DB 中不同评分 SNP 的潜在功能意义3.6 SNPs 基因分型3.61 候选 SNPs 的基因分型方法，采用广泛应用的 TaqMan 探针实时荧光量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术。TaqMan 探针的荧光与目标序列的扩增相关，其原理为利用 Taq 酶 5’→3的外切活性，，通过加入和 DNA 模板序列的特异型杂交，荧光基团连接在探针5’ 末端表现为 518nm 的峰值荧光，而淬灭剂则在 3’ 末端，表现为 582nm 的值荧光。当探针完整时，荧光基团发射的荧光处于被抑制状态。但在进行延伸应时，荧光发射基团和淬灭剂分离。模板每复制一次，荧光信号就复制一次，着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产的数量呈正比关系。所用 PCR 反应体系总量为 5μL，经历 40 个循环。PCR

示意图,基因分型,软件,示意图

26图3 SDS2.4软件基因分型示意图3.7 主要仪器ABI PRISM 7900HT 型荧光定量 PCR 仪美国 Applied Biosystems 公司ABI 9700 PCR 扩增仪美国 Applied Biosystems 公司MJ PTC-200 型 PCR 扩增仪美国 MJ Research 公司EP5604 稳压稳流电泳仪南京科宝仪器研究所DYCP-31D 水平电泳槽南京科宝仪器研究所AlphaImager2200 紫外成像仪美国自然基因有限公司DK-600S 型恒温水浴箱上海精宏实验设备有限公司72-21 型高速冷冻离心机德国 Eppendorf 公司
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R512.63

【参考文献】