慢性乙型肝炎患者铁代谢血清学研究及HBV对肝细胞铁代谢的影响

发布时间：2020-04-29 09:31

【摘要】：目的分析慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者血清铁代谢相关指标与炎症程度的相关性及乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)对肝细胞铁代谢造成的影响。方法分别检测41例CHB患者和20例健康体检者血清铁代谢相关指标、肝功生化指标,并分析CHB患者血清铁代谢相关指标与肝功能生化指标的相关性。铁代谢相关指标包括血清铁(Serum iron,SI)、血清铁蛋白(Serum ferritin,SF)、转铁蛋白(Transferritin,TRF)、可溶性转铁蛋白受体(Soluble transferrin receptor,s Tf R)、转铁蛋白饱和度(Transferritin saturation,TS)、总铁结合力(Total iron-binding capacity,TIBC)、不饱和铁结合力(Unsaturated iron-binding capacity,UIBC)、铁调素(Hepcidin,HEPC)。肝功生化指标包括丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、白蛋白(Albumin,ALB)。最后将表达HBV全基因组质粒p SM2-HBV分别转染至Hep G2细胞、Huh7细胞。然后运用蛋白质印迹法(Western blot,WB)、逆转录定量PCR(Reverse transcription and real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)、细胞免疫荧光技术,通过将HBV瞬时转染和稳定转染肝细胞两种方式,探讨HBV转染肝细胞后所造成的肝细胞铁代谢紊乱情况。结果与健康对照组相比,CHB患者组SI、SF、TS均明显升高,TRF,s Tf R,TIBC,UIBC,HEPC均明显降低(P0.01)。经过Spearman相关性分析,在CHB患者组中SI(r=0.438,P=0.004),SF(r=0.585,P0.001)与ALT呈显著正相关,HEPC与ALB呈显著正相关(r=0.422,P=0.006)。Hep G2.215细胞中铁蛋白(Ferritin,FER)、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表达水平显著高于Hep G2细胞(P0.05),而转铁蛋白受体(Transferrin receptor,Tf R)的表达水平显著低于Hep G2细胞(P0.05)。与空载体pUC19转染的HepG2细胞相比,用pSM2-HBV质粒转染后的HepG2细胞中FER、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表达水平显著升高(P0.05),而Tf R的表达水平显著降低(P0.05)。与空载体p UC19转染的Huh7细胞相比,用p SM2-HBV质粒转染后的Huh7细胞中FER、TRF和HEPC m RNA和蛋白的表达水平显著升高(P0.05),而Tf R的表达水平显著降低(P0.05)。结论CHB患者体内存在血清铁代谢紊乱现象,并且CHB患者SI、SF水平与ALT呈显著正相关性,提示其与肝脏炎症严重程度呈显著正相关性;HEPC血清水平与ALB水平呈显著正相关性,表明HEPC血清水平下降可能与肝细胞蛋白合成能力下降有关。在肝细胞中,HBV可上调FER,TRF和HEPC的表达,下调Tf R的表达。
【图文】：

患者,相关性分析

28图 2 41 例 CHB 患者铁代谢指标与肝功能指标的关A. CHB 患者 SI 和 ALT 相关性分析；B. CHB 患者 SF和 ALB 相关性分析。Fig. 2 Relationship between the serum levels of ironin the 41 CHB patients.A. Correlation of serum iron concentration with ALTserum ferritin concentration with ALT levels in CHB concentration with albumin levels in CHB patients.

检测分析,表达水平,细胞

34图 4 Western blotting 检测分析 FER、TRF、TfR 表达水平。A.使用 Western blotting 分析 pUC19 空载体转染的 HepG2 细胞（对照组）和 pSM2-HBV 质粒转染的 HepG2 细胞（瞬时转染 HepG2 细胞组）中的 FER, TRF 和 TfR 蛋白表达水平。B.使用Western blotting 检测 HepG2（对照组）和 HepG2.215 细胞（稳定转染组）中的 FER, TRF 和 TfR蛋白表达水平。C.使用 Western blotting 分析 pUC19 空载体转染的 Huh7 细胞（对照组）和pSM2-HBV 质粒转染的 Huh7 细胞（瞬时转染 Huh7 细胞组）中的 FER, TRF 和 TfR 蛋白表达。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R512.62

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