DUSP3、ASAP1、GBP5基因在结核患者和结核潜伏感染人群中的表达研究

发布时间：2020-06-02 20:55

【摘要】：目的:探讨双特异性磷酸酶3(dual specificity phosphatase 3,DUSP3)、二磷酸腺苷核糖化因子鸟苷酸激酶1(Arf GAP with SH3 domain,ankyrin repeat and PH domain1,ASAP1)、鸟苷酸结合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因在肺结核患者及潜伏结核感染人群中的表达情况。通过DUSP3、ASAP1、GBP5基因在肺结核患者和潜伏结核感染人群的表达,探讨确诊结核患者、结核潜伏感染人群及非结核人群之间基因表达的差异,有针对性的对不同群体制定不同的预防、诊疗方案。方法:选取青岛大学附属医院呼吸内科和青岛市黄岛区结核病医院2016年8月至2017年5月就诊的患者及这期间青岛大学附属医院健康体检中心健康体检人员为研究对象。以痰涂片是否找到结核分枝杆菌((Mycobacterium tuberculosis,MTB)和γ-干扰素释放试验(IGRAs)为标准,将符合条件的研究对象分为3组,其中确诊肺结核组40例,结核潜伏感染组40例,健康对照组40例。用肝素锂抗凝试管抽取这三组受试者的外周静脉血3ml,提取血液里的人外周血单个核细胞,然后提取其中的RNA,逆转录合成c DNA,应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测这三组人群基因表达情况,比较这3个基因的相对表达量2-△△Ct。数据分析前用SPSS软件检验方差齐性,P0.05,表示方差齐。3组人群年龄用x±s表示。应用Graph Pad Prim 5.0软件对数据进行统计学分析,两组均数间应用t检验比较,三组均数间用方差分析比较,P0.05表示差异有统计学意义。结果:GBP5基因在3组受试者中的基因表达有统计学意义(F=7.23 P=0.001)。确诊肺结核组基因相对表达量(1.58±0.80)显著高于潜伏感染组(1.09±0.68),差异有统计学意义(t=2.93,P=0.004),确诊肺结核组基因相对表达量(1.58±0.80)显著高于健康对照组(1.04±0.61),差异有统计学意义(t=3.40,P0.01)。潜伏感染组(1.09±0.68)与健康对照组(1.04±0.61)差异无统计学意义(t=0.39,P=0.70)。DUSP3基因在3组受试者中的基因表达差异无统计学意义(F=2.21 P=0.11)。ASAP1基因在3组受试者中的基因表达差异无统计学意义(F=0.26 P=0.77)。结论:1.GBP5基因在肺结核确诊组、结核潜伏感染组、健康对照组表达存在差异性。2.DUSP3基因在三组人群中的表达差异无统计学意义,但是不排除样本量小,存在误差的可能。3.ASAP1基因在三组人群中的表达差异无统计学意义,但是不排除样本量小,存在误差的可能。4.GBP5基因在结核病患者、结核潜伏感染人群、健康人群中的基因表达存在不同。GBP5基因可以筛选结核患者,其对结核病的诊治和预防具有重要的指导意义。对于潜伏结核感染人群,未证实其与健康对照组人群表达的差异性。
【图文】：

溶解曲线,引物,均平,定量检测

注：ABC 分别为 DUSP3、ASAP1、GBP5 的溶解曲线。其中横坐标代表温度，纵坐标为将荧光强度的变化对温度变化的求导。图 1 引物的溶解曲线5.DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的扩增曲线DUSP3、ASAP1、GBP5 的扩增曲线曲线均平滑且稳定，，曲线形状较完好，符合定量检测标准，结果可信。由扩增曲线可以得出 Ct 值，根据 Ct 值，计算基因的相对表达量 2-△△Ct。见图 2。

扩增曲线,设定范围,循环数,管内

23注：ABC 分别为 DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的扩增曲线。其中横坐标代表 Ct 值，指每个反管内荧光信号到达设定范围时所经历的循环数；纵坐标代表相对荧光量。图 2 DUSP3、ASAP1、GBP5 基因的扩增曲线
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R52

【参考文献】