金属蛋白酶1在皮肤癣菌鉴定中的应用研究

发布时间：2020-07-15 04:21

【摘要】：目的:比较通用引物ITS序列和金属蛋白酶1在皮肤癣菌属、酵母菌属、霉菌属扩增的敏感性;探讨金属蛋白酶1联合限制性内切酶Hinf I在皮肤癣菌菌种鉴定中的敏感性和特异性,为临床诊治提供理论依据。方法:1、采集2016年11月至2017年5月在山西医科大学第二医院门诊拟诊手足癣、体癣和甲真菌病的患者125例,记录患者一般信息情况,用75%的酒精消毒皮损后,用钝刀刮取患处和正常皮肤交界处的皮屑或者甲屑,将标本大致分为两份,一份滴加10%KOH液,光镜下观察;另一份接种于含氯霉素的沙堡弱培养基置于25℃恒温培养箱中培养,培养两周至四周,分别观察结果并记录;2、统计镜检阳性的病例数,培养阳性的病例数并记录结果;3、培养阳性的菌株纯化后用传统的氯化苄方法提取DNA。再分别用ITS4、ITS86和金属蛋白酶1特异性引物扩增并进行比较分析。金属蛋白酶1联合限制性内切酶Hinf I对目的片段进行酶切,并依据酶切后的片段大小进行菌种的鉴定。结果:1、共收集临床病例125例,其中确诊真菌感染的病例62例,临床标本中镜检阳性标本31例(35.2%),培养阳性菌株57例(64.7%)。其中菌落形态似皮肤癣菌属45例,酵母菌属12例,霉菌属5例。经限制性内切酶酶切鉴定红色毛癣菌40例,犬小孢子菌5例。2、临床菌株在培养基上菌落形态多样,大致可分为三种:酵母菌属菌落呈柔软、光滑、奶酪状;皮肤癣菌属菌落形态呈白色绒毛状、羊毛状、粉末状,部分菌落基底有不同的色素沉着;霉菌属菌落形态呈疏松、干燥、不透明,棉絮状、网状、灰黑色,灰绿色等有颜色的菌落。3、ITS4、ITS86通用引物扩增培养阳性标本均出现大约300-400bp左右大小的片段,但片段大小差异不大,不能具体鉴定到种;通用引物对不同属的临床真菌扩增具有普遍适用性;菌落形态似皮肤癣菌属的菌株经金属蛋白酶1基因设计的特异性引物扩增后出现大约700bp左右的条带,而菌落形态学似酵母菌属和霉菌属的菌株均未扩增出明显的目的条带。4、金属蛋白酶1基因设计的特异性引物扩增产物采用Hinf I酶切后可将红色毛癣菌切为133bp、255bp、358bp三条片段;犬小孢子菌则切为277bp、447bp两条片段。结论:1、我们采用镜检和培养进行临床诊断,镜检方法方便、快速,但阳性率较低,培养方法阳性率比镜检结果高,相比文献报道阳性率低,该方法可以鉴定到属,但不能到种,仍具有一定的临床诊断价值;2、在我科临床浅部真菌病感染中红色毛癣菌仍是最常见、最主要的致病菌;3、通用引物具有普遍适用性,对常见的皮肤癣菌属、酵母菌属、霉菌属均具有敏感性;但具体鉴定到菌种需联合限制性内切酶酶切;4、首次采用金属蛋白酶1对于临床常见的皮肤癣菌进行鉴定,结果具有较高的敏感性,联合特异性限制性内切酶Hinf I酶切后可以具体鉴定到菌种,对于临床中常见的皮肤癣菌感染诊断价值更高,可以作为传统方法的辅助性诊断方法。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R756
【图文】：

山西医科大学硕士学位论文2 结 果培养结果如下例 125 例，其中确诊真菌感染的病例 62 例，临)，培养阳性菌株 57 例（64.7%）；其中菌落形例，霉菌属 5 例。的菌株在培养基上菌落形态多样，大致可分为奶酪状；皮肤癣菌属菌落形态呈白色绒毛状、同的色素沉着；霉菌属菌落形态呈疏松、干燥 1 所示：

培养二周菌落形态

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【参考文献】

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1 刘昕;2型糖尿病合并甲真菌病患者易感因素及病原菌分析[D];山西医科大学;2015年

本文编号：2755972