VDR及DBP基因多态性与HBV背景下肝炎、肝硬化、肝癌遗传易感性研究

发布时间：2020-08-02 13:19

【摘要】：目的：研究维生素D受体（vitamin D receptor，VDR）基因的单核甘酸多态性（SNP）位点rs11568820、rs2228570、rs3782905和维生素D结合蛋白（vitamin D binding protein，DBP）基因SNP位点rs7041在广西人群中的分布；分析rs11568820、rs2228570、rs3782905和rs7041四个SNP位点与广西HBV背景下慢性肝炎、肝硬化、肝癌患病风险之间的关系。为HBV感染相关肝病的防治提供新思路。方法：采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术、聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）技术及DNA测序法，对广西HBV背景下的192例慢性乙型肝炎（CHB）患者、104例肝硬化（LC）患者、184例原发性肝细胞癌（HCC）以及180例健康体检者的VDR基因rs11568820、rs2228570、rs3782905和DBP基因rs7041四个SNP位点进行检测，并使用Roche e601电化学发光免疫分析仪测定其血清25-羟基维生素D水平。运用SHEsis在线软件对VDR基因rs11568820、rs2228570、rs3782905位点构建单倍型，并分析其与CHB、LC及HCC患病风险之间的关系。使用拟合优度2检验分析各组各位点基因型分布是否符合哈-温平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。使用Logistic回归分析，对性别、年龄因素进行校正，计算比值比（Odds ration，OR）以及95%可信区间（Confidence Interval，CI），分析各位点与CHB、LC及HCC患病风险间的关系。结果： 1.各组4个位点基因型的频率分布均符合HWE（p0.05），本研究人群具有代表性和可比性； 2.广西人群VDR基因rs11568820位点发现GG、GA、AA三种基因型，GA基因型和A等位基因可降低CHB的患病风险（p=0.045，OR=0.637,95%CI：0.410-0.991；p=0.037，OR=0.725,95%CI：0.536-0.980）。VDR基因rs2228570位点存在CC、CT和TT三种基因型，TT基因可增加CHB和HCC的患病风险（p=0.047，OR=1.792,95%CI：1.008-3.187；p=0.019，OR=2.149,95%CI：1.134-4.075），T等位基因亦可增加CHB和HCC的患病风险（p=0.046，OR=1.342,95%CI：1.005-1.792；p=0.016，OR=1.489,95%CI：1.077-2.060）。VDR基因rs3782905共发现CC、CG、GG三种基因型，各基因型和等位基因与CHB、LC、HCC的患病风险均无明显相关（p0.05）。DBP基因rs7041位点出现TT、TG、GG三种基因型，GG基因型可显著增加LC和HCC的患病风险（p=0.002，OR=4.011,95%CI：1.676-9.603；p=0.026，OR=2.576,95%CI：1.121-5.921），G等位基因可明显增加LC和HCC的患病风险（p=0.007，OR=1.727,95%CI：1.159-2.572；p=0.024，OR=1.501,95%CI：1.055-2.136）。 3.男性人群中，VDR基因rs11568820位点各基因型和等位基因与CHB、LC、HCC的患病风险均无明显相关（p0.05）。VDR基因rs2228570位点CT基因型、TT基因型和T等位基因均可增加CHB和HCC的患病风险。VDR基因rs3782905位点各基因型和等位基因与CHB、LC、HCC的患病风险均无明显相关。DBP基因rs7041位点GG基因型和G等位基因可显著增加LC、HCC的患病风险。 4.女性人群VDR基因和DBP基因的四个SNP位点均与CHB、LC、HCC的患病风险均无明显相关（p0.05）。 5.VDR基因rs11568820、rs2228570和rs3782905位点共构建出7种单倍型，GTC单倍型可明显增加CHB的患病风险（p=0.014，OR=1.492,95%CI：1.085-2.054），ACC和GCG单倍型均明显降低HCC的患病风险（p=0.014，OR=0.572,95%CI：0.365-0.896；p=0.011，OR=0.464,95%CI：0.254-0.847） 6.广西人群VDR基因和DBP基因4个SNP位点各基因型及等位基因频率与亚洲地区黄色人种相近，而与黑色人种和白色人种有较大差异。 7. CHB组、LC组和HCC组三者间两两比较，血清25-羟基维生素D水平差异均具有统计学意义（p0.05）,按CHB组、LC组和HCC组递增。结论: 1.VDR基因rs11568820位点的GA基因型和A等位基因可能是CHB患病的保护因素；VDR基因rs2228570位点的TT基因型和T等位基因可能是CHB和HCC患病的危险因素；DBP基因rs7041位点GG基因型和G等位基因可能是LC和HCC患病的危险因素。 2. VDR基因rs2228570位点的CT基因型、TT基因型和T等位基因可能是男性人群CHB和HCC患病的危险因素；DBP基因rs7041位点GG基因型和G等位基因可能是男性人群LC和HCC的危险因素。 3.维生素D可能参与HBV背景下肝病的发生发展，其水平随严重程度增加而递增。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.62;R575.2;R735.7
【图文】：

电泳图,位点,电泳图,片段

1. PCR 扩增产物电泳结果1.1 VDR 基因 rs11568820 位点扩增产物电泳结果rs11568820 位点基因型使用 PCR-SSP 技术进行分析，PCR 扩增反应使用了两对分别针对 G 等位基因和 A 等位基因的片段特异性引物。只有存在G 等位基因时，才能扩增出 110bp 大小的特异性片段；同理只有存在 A 等位基因时，才能扩增出 235bp 大小的特异性片段。297bp 大小的片段为非特异性产物，在所有样本的扩增反应中均存在，故不影响分型。当 SNP 位点为 GG 基因型时，PCR 产物为两条 297bp 和 110bp 的片段；当 SNP 位点为AA 基因型时，PCR 产物为两条 297bp 和 235bp 的片段；当 SNP 位点为 GA基因型时，PCR 产物为三条 297bp、235bp、110bp 的片段，电泳结果如图 1所示。

位点,基因,PCR扩增产物,电泳

图 2 VDR 基因 rs2228570 位点 PCR 扩增产物（1～9 泳道为扩增产物，10 泳道为 marker）1.3 VDR 基因 rs3782905 位点扩增产物电泳结果rs3782905 位点的扩增产物片段长度为 304bp，电泳结果如图 3 所示。

位点,基因,PCR扩增产物,电泳

【参考文献】