昼夜节律紊乱对小鼠T细胞功能和HBV清除的影响

发布时间：2020-09-01 07:29

　　 目的通过调整昼夜明暗交替的时间,研究昼夜节律紊乱对C57BL/6小鼠T细胞功能的影响,同时应用HBV高压水注射小鼠模型,研究昼夜节律紊乱对HBV清除的影响。材料和方法1.购买5周龄的雄性C57BL/6小鼠适应环境1周后,随机分为4组,包括昼夜节律提前组(Advanced circadian rhythm,ACR)、昼夜节律延迟组(Delayed circadian rhythm,DCR)、昼夜节律颠倒组(Reversed circadian rhythm,RCR)和正常昼夜节律组(Normal circadian rhythm,NCR),分别按不同方案进行昼夜明暗交替时间的调整或维持正常的昼夜明暗交替时间。2.按上述不同昼夜明暗交替时间处理2周后,每组处死4只小鼠,分离肝脾淋巴细胞,并通过流式细胞术检测相关免疫细胞频率。3.按上述不同昼夜明暗交替时间处理2周后,通过高压尾静脉注射pAAV/HBV1.2质粒。在不同时间点通过小鼠内眦静脉采血,监测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb及HBcAb的动态变化。4.通过FlowJo 10软件分析流式检测结果,SPSS 20.0软件进行统计学分析,Graphpad prism 7软件进行图表制作。结果1.与正常昼夜节律组小鼠相比,昼夜节律提前组、昼夜节律延迟组和昼夜节律颠倒组C57BL/6小鼠肝脾内CD4~+T细胞、脾内CD8~+T细胞、肝脾内CD4~+CD44~+CD62L~-T细胞频率降低,肝内CD8~+T细胞频率升高。2.与正常昼夜节律组小鼠相比,昼夜节律提前组、延迟组和颠倒组小鼠肝脾内的CD4~+TNF-α~+T细胞和CD8~+TNF-α~+T细胞的频率升高;昼夜节律提前组和延迟组肝内CD8~+IFN-γ~+T细胞频率升高;昼夜节律提前组、延迟组和颠倒组C57BL/6小鼠肝内CD4~+Eomes~+T细胞及CD8~+Eomes~+T细胞频率、CD4~+Tbet~+T细胞及CD8~+Tbet~+T细胞频率均增加。3.与正常昼夜节律组小鼠相比,昼夜节律提前组小鼠肝内CD4~+CD107a~+T细胞和CD8~+CD107a~+T细胞频率增加,而昼夜节律延迟组和颠倒组肝内CD4~+CD107a~+T细胞和CD8~+CD107a~+T细胞频率下降。而脾内CD4~+CD107a~+T细胞和CD8~+CD107a~+T细胞的频率在昼夜节律提前组、延迟组和颠倒组均降低。4.与正常昼夜节律组小鼠相比,昼夜节律提前组、延迟组和颠倒组小鼠HBsAg和HBeAg的清除减慢,其HBsAb的产生也相应延迟;而HBeAb和HBcAb的水平则不受明显影响。结论1.无论是昼夜节律的提前、延迟和颠倒,均降低了小鼠肝脾内的CD4~+T细胞、脾内CD8~+T细胞和肝脾内CD4~+CD44~+CD62L~-T细胞频率,虽然其肝内表达TNF-α、INF-γ、Eomes、Tbet等促炎性细胞因子的T细胞增多,但肝内和脾内CD4~+CD107a~+T细胞和CD8~+CD107a~+T细胞频率则下降,提示昼夜节律的紊乱对小鼠T细胞的频率和功能均产生明显影响。2.无论是昼夜节律的提前、延迟和颠倒,均延迟了HBV高压水注射小鼠模型HBV的清除。昼夜节律紊乱导致T细胞功能变化可能参与了HBV清除的延迟,但其具体机制还有待进一步研究。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R512.62
【部分图文】：

图 1.昼夜节律紊乱对小鼠 CD4+T 细胞频率的影响（A.肝内 CD4+T 细胞频率；B. 脾内 CD4+T 细胞频率）昼夜节律的提前、延迟和颠倒均增加了小鼠肝内 CD8+T 细胞频率，其中延迟组及颠倒组的细胞频率显著高于正常节律组（图 2A）。此外 3 种昼夜节律紊乱均降低了脾内 CD8+T 细胞频率，但和正常节律组间的差异无显著性（图 2B）。+++

图 1.昼夜节律紊乱对小鼠 CD4+T 细胞频率的影响（A.肝内 CD4+T 细胞频率；B. 脾内 CD4+T 细胞频率）昼夜节律的提前、延迟和颠倒均增加了小鼠肝内 CD8+T 细胞频率，其中延迟组及颠倒组的细胞频率显著高于正常节律组（图 2A）。此外 3 种昼夜节律紊乱均降低了脾内 CD8+T 细胞频率，但和正常节律组间的差异无显著性（图 2B）。

图 3.昼夜节律紊乱对小鼠 CD4+CD44+CD62L-T 细胞频率的影响（A.肝内 CD4+CD44+CD62L-T 细胞频率；B. 脾内 CD4+CD44+CD62L-T 细胞频率）3.1.3 昼夜节律紊乱对小鼠 T 细胞促炎细胞因子表达的影响。细胞因子在炎症的发生、发展和转归过程中发挥重要作用，可分为促炎细胞因子和抗炎细胞因子，TNF-α、IFN-γ、Eomes、Tbet 等均属于促炎细胞因子。TNF-α 是由单核巨噬细胞和 T 细胞激活后产生的促炎细胞因子, 在炎症反应时起到始动和核心作用。本研究中昼夜节律的提前、延迟和颠倒均增加了小鼠肝内CD4+TNF-α+T 细胞频率，其中昼夜节律提前组与正常节律组相比有显著差异（图 4A）。上述 3 种昼夜节律的调整还增加了脾内 CD4+TNF-α+T 细胞频率，但和正常节律组间的差异均无显著性（图 4B）。不仅如此，3 种昼夜节律的调整还增加了小鼠肝内及脾内的 CD8+TNF-α+T 细胞频率，但均只有昼夜节律提前组和正常节律组相比有显著差异（图 4C、4D）。

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本文编号：2809438