白念珠菌对高糖环境HaCaT细胞表达TLR2与IL-8的影响

发布时间：2020-09-08 09:57

　　目的观察在高糖环境和相对低糖环境下人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的生长情况,以及白念珠菌干预不同环境下生长的HaCaT细胞后的情况;检测不同糖浓度环境下、不同时间段HaCaT细胞表达Toll样受体2、Toll样受体2mRNA(Toll-like receptor 2、Toll-like receptor 2 mRNA,TLR2、TLR2 mRNA)以及IL-8的差异,并探讨其在皮肤抗真菌过程中的免疫机制。方法分别在高糖和低糖DMEM培养基下共同培养HaCaT细胞;在RPMI1640培养液、高糖DMEM培养液、低糖DMEM培养液中诱导白念珠菌菌丝,选择诱导菌丝状态较好的1组的用于后续细胞干预实验。将高糖和低糖环境下培养的HaCaT细胞分别与白念珠菌菌悬液混合培养,分别设立为高糖实验组(HG-Test组),低糖实验组(LG-Test组);同时将两种培养基下未受白念珠菌感染的HaCaT细胞做对照,分别设立为高糖对照组(HG-Control组),低糖对照组(LG-Control组)。观察不同环境下HaCaT细胞的生长情况以及细胞与白念珠菌共同培养时的生长情况。在第1、6、24小时提取各组中总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(Real-Time PCR,RT-PCR)的方法检测各组中TLR2 mRNA表达量的变化;在第1、6、24小时提取各组中总蛋白,通过Western blot技术检测各组中TLR2表达量的变化;在第1、4、6、12小时提取各组中细胞/细胞与真菌的培养上清液,通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检各组中IL-8表达量的变化。结果在RPMI1640培养液、高糖DMEM培养液、低糖DMEM培养液诱导白念珠菌菌丝的过程中,发现RPMI1640培养液诱导菌丝成功率相对较高,达92.17±0.18%,且菌丝状态较好,可用于后续干预实验。白念珠菌干预HaCaT细胞后,HG组与LG组未见明显差异,随着培养时间延长,可见白念珠菌趋于簇集,培养上清液趋于浑浊。在第1、6、24小时,TLR2 mRNA表达量始终表现为LG-Test组高于HG-Test组,LG-Control组高于HG-Control组,实验组高于对照组(P㩳0.01),且HG-Test组在第24小时与LG-Test组相比下降得更明显(P㩳0.01);而HG-Control组与LG-Control组则始终无明显改变(P㧐0.01)。TLR2的表达量始终表现为LG-Test组高于HG-Test组,LG-Control组高于HG-Control组,且实验组高于对照组,尤其在对照组中,差异更明显(P㩳0.01)。且受干预后,TLR2与TLR2 mRNA的变化趋势在HG、LG组中相同,即从干预开始其量分别增加,持续至第6小时,24小时下降较明显,且HG组在第24小时与LG组相比TLR2的表达量下降得更明显(P㩳0.01)。在第1、4、6、12小时,IL-8的表达量始终表现为LG-Test组高于HG-Test组,LG-Control组高于HG-Control组,且实验组高于对照组(P㩳0.01)。且受干预后,整体上其变化趋势在HG、LG组中相同,即从干预开始其量分别增加,持续至第6小时,12小时下降较明显,且HG-Test组与LG-Test组在第12小时IL-8的表达量下降得均较明显(P㩳0.01)。结论HaCaT细胞感染白念珠菌后,高糖环境不利于角质形成细胞TLR2与IL-8的分泌,推测糖尿病患者易患白念珠菌感染相关皮肤病与角质形成细胞表达TLR2及IL-8比正常血糖者减少有关。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R587.2;R756.5
【部分图文】：

白念珠菌,诱导菌,情况

天津医科大学硕士学位论文一、白念珠菌对高糖环境 HaCaT 细胞表达 TLR2 与 IL-8 的影响三组白念珠菌分别在含 10% 胎牛血清的 RPMI1640 培养液、高糖 DMEM培养液、低糖 DMEM 培养液中诱导菌丝 3 小时。每组中白念珠菌起始浓度均为2×106/ml ，均置摇床以 150 r/min，37℃环境下震荡培养。诱导结束后，显微镜下观察各组中白念珠菌菌丝相的状态。可见在 RPMI1640 培养液中，白念珠菌大部分形成细长菌丝，（图 1-a）；在高糖 DMEM 培养液环境下，白念珠菌数量明显增加，部分形成菌丝，但是菌体之间粘连成团（图 1-b）；在低糖 DMEM培养液中，可见白念珠菌部分形成菌丝，数量无明显变化（图 1-c）。统计各组菌丝生成率以及白念珠菌数量的改变，结果如下（表 4），三种环境下，白念珠菌经过 3 小时的诱导菌丝，从菌丝形成率和白念珠菌数量的稳定性两方面考虑，发现 RPMI1640 培养液是较为合适的选择。

白念珠菌,硕士学位论文,医科大学,生长情况

高糖、低糖环境下HaCaT细胞生长情况

白念珠菌,共同培养,情况,培养情况

大学硕士学位论文一、白念珠菌对高糖环境 H表达 TLR2 与 IL-8 的影糖、低糖环境下白念珠菌与 HaCaT 细胞共同培养情况糖、低糖 DMEM 培养基环境下的 HaCaT 细胞分别与白念珠菌，观察其第 1、6 小时培养情况（a b c d）。可见白念珠菌呈菌CaT 细胞接触，LG 组与 HG 组的白念珠菌与 HaCaT 细胞接触于延长，未见明显差异。随着培养时间延长，可见白念珠菌趋液趋于浑浊（图 3）。

【参考文献】