拉米夫定或替比夫定耐药患者PBMCs内HBVDNA水平和HBVDNA聚合酶区耐药突变模式

发布时间：2020-09-09 16:32

　　 研究背景及目的乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球面临的重要公共卫生问题。HBV慢性感染的病人肝脏损害会持续进展,最终会导致肝硬化或肝细胞癌的发生。HBV感染增加了肝脏并发症和死亡率的风险,给人民群众生活带来严重的经济负担。为了降低HBV感染病人的并发症和死亡率,抗病毒治疗是唯一有效的治疗手段。目前治疗HBV慢性感染的抗病毒药物包括两大类：干扰素和核苷(酸)类药物。尽管应用干扰素可能会导致持久的病毒学应答,但干扰素的不良反应及高昂的治疗花费限制了其在临床的广泛应用。因此,核苷(酸)类药物成为抗HBV病毒最常用的药物。核苷(酸)类药物作用于HBV DNA聚合酶基因的逆转录酶区,抑制病毒复制。尽管多种抗病毒药物已应用于临床,但还没有一种药物能够彻底清除HBV感染,这决定了抗病毒治疗的长期性。核苷(酸)类似物长期抗病毒治疗的不良后果就是出现耐药病毒株。拉米夫定和替比夫定均属于左旋核苷酸。与左旋核苷酸相关的耐药位点是发生在聚合酶基因逆转录酶区YMDD模序内的突变,即rtM204I/V。研究表明外周血单核细胞(PBMCs)中存在HBV感染,且其病毒载量与血清当中HBV DNA水平相关。而对于经核苷(酸)类似物治疗并产生耐药突变的慢性乙型肝炎患者PBMCs中HBV DNA水平与血清当中HBV DNA载量的关系未见报道。尽管很多研究已经报道了血清当中HBV DNA聚合酶基因逆转录酶区耐药突变的特点,而对于PBMCs中是否同样存在类似的耐药相关突变,PBMCs及血清中HBV耐药模式是否相同未见报道。核苷(酸)类似物治疗产生耐药突变的慢性乙型肝炎患者经优化抗病毒治疗方案后,其抗病毒治疗对PBMCs中HBV转阴的作用如何,我们尚不清楚。本研究的目的是检测拉米夫定和替比夫定耐药患者血清和PBMCs中HBV DNA水平,探讨其相关性；检测这些耐药病人PBMCs内HBV DNA聚合酶基因逆转录酶区耐药突变模式；探讨经优化的抗病毒治疗对这些耐药病人PBMCs中HBV DNA的治疗效果。材料和方法51例病人均为2012年1月～2013年1月来山东大学附属济南市传染病医院门诊就诊或住院的慢性乙型肝炎患者。所有病人正在接受抗病毒治疗至少半年,且在服药期间出现病毒学突破(HBV DNA水平比治疗中的最低点上升至少1个log10copies/ml)。将病人分为拉米夫定组(LAM组：32例)和替比夫定组(LdT组,19例)。对于血清中检测到LAM或LdT耐药的病人,加用阿德福韦酯(ADV,l0mg/天)治疗,收集基线、24周和48周血清及相应PBMCs。应用实时荧光定量PCR检测血清及相应PBMCs中HBV DNA,应用直接测序的方法检测HBV DNA聚合酶基因逆转录酶区耐药突变情况。应用SPSS13.0对结果进行统计分析。研究结果1患者基线特征51例入组病人均为中国汉族人口,HBV基因分型显示均为C型。20例病人(39.22%；LAM组：11例,LdT组：9例)血清及PBMCs中均未检测到耐药突变。31例检测到突变病人全部为HBsAg阳性,大部分病人是男性,HBeAg阳性。两组病人基线特征比较无差别。2血清和PBMCs HBVDNA水平比较LAM组和LdT组病人血清和PBMCs中均检测到HBV DNA。LAM组21例病人血清HBV DNA水平为5.87 ±1.041og10copies/ml, PBMCs中HBV DNA水平为4.63±1.14 log10copies/ml; LdT组10例病人血清HBV DNA水平为5.82±0.82log10copies/ml, PBMCs中HBV DNA水平为4.23 ±0. 901og10copies/ml。无论是LAM组还是LdT组,血清中HBV DNA水平明显高于PBMCs(LAM组：t=5.69,P0.05：LdT组：t=9.87,P0.05)。3血清和PMBCs中HBV DNA水平相关性分析不论是LAM组还是LdT组,PBMCs中HBV DNA水平与血清中HBV DNA水平呈明显正相关((LAM组:r=0.584, p0.01; LdT组：r=0.829,p0.01)。4血清和PMBCs HBV DNA耐药突变模式血清和PBMCs中HBV DNA聚合酶区耐药突变不完全相同。在LAM组耐药的病人,血清中检测到三种耐药突变模式：单位点突变(rtM204I,3/21,14.29%)、双位点突变(rtL180M+rtM204I或者rtL180M+rtM204V或者rtL180M+rtM204I/V, 11/21,52.38%)及三个位点突变(rtL180M+rtM204I+其它或者rtL180M+rtM204V+其它或者rtL180M+rtM204I/V+其它,7/21,33.33%)。在本组病人的PBMCs中,也检测到了三种突变模式。进一步分析发现,85.71%(18/21)的病人,其PBMCs中HBV耐药突变模式与血清中HBV突变模式相同。在LdT组病人血清中检测到了两种耐药突变模式：单位点突变(rtM204I,8/10,80.00%)和双位点突变(rtL180M+rtM204I,2/10,20.00%)。在LdT组病人,75%(6/8)病人血清和PBMCs中HBV耐药模式相同。5抗病毒治疗对PBMCs中HBV的影响31例产生耐药病人加用阿德福韦酯(10mg/d)治疗,24周时有1例病人失访(此病人为LdT耐药患者)。21例LAM耐药病人,有10例病人血清和PBMCs中仍能检测到HBVDNA(血清：4.26 ±1. Ollog.ocopies/ml, PBMCs:4.06 ±0.981og10copies/ml)。经24周抗病毒治疗,这10例病人血清中HBV DNA下降幅度高于PBMCs中HBVDNA下降幅度(t=5.62,p0.05)；9例LdT耐药病人在加用阿德福韦酯治疗24周时,3例病人血清及PBMCs中检测到了病毒,其余6例血清及PBMCs中均未检测到病毒。至随访48周时,LAM耐药病人有1例失去联系。20例病人中有19(95%)例血清及PBMCs中均未检测到病毒。9例LdT耐药病人在48时血清及PBMCs中均未检测到病毒。结论LAM或LdT耐药病人PBMCs中HBV DNA水平明显低于血清中HBV DNA水平,两者存在正相关。大部分病人PBMCs中HBV耐药突变模式与血清中相同。优化抗病毒治疗方案后抗病毒治疗对PBMCs中HBV的影响要小于对血清中HBV DNA的影响。我们的研究成果有助于增加对HBV耐药的认识,为抗病毒治疗的长期性提供了理论依据。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R512.62

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

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本文编号：2815212