miRNA-451a及靶基因在结核病发病机制中的作用及诊断价值的研究
发布时间：2020-10-09 23:26
第一部分miRNA-451a及其靶基因在结核病发病过程中的作用[目的]:本研究旨在揭示miRNA-451a在结核病发病过程中发挥的调节作用。通过分析miRNA-451a及其部分靶基因在继发性肺结核、血行播散型结核病患者和健康人中的表达差异,分析其在结核病发生发展过程中的作用。并建立细胞感染模型,进一步验证miRNA-451a的调节作用。同时通过对细胞感染模型的分析,揭示miRNA-451a对巨噬细胞吞噬细菌和杀菌抑菌作用的影响。[方法]:收集符合入组标准的继发性肺结核患者、血行播散型结核病患者和健康人的外周静脉血样本,对所有纳入标本进行RNA提取,并将RNA反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR,对三组样本的miRNA-451a及其靶基因MIF、MMP-9进行相对定量分析,比较其差异。本研究细胞感染模型的构建采用THP-1细胞,设计了 miRNA-451a类似物进行转染,使其表达上调或抑制。后续使用H37Rv标准毒株进行细胞感染实验,对miRNA-451a表达情况不同的细胞组进行菌落形成单位(Colony-Forming Units,CFU)的对比,分析miRNA-451a对巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌以及细胞内细菌存活情况的影响。并通过Western Blot方法对感染后细胞内MIF蛋白的表达水平进行对比分析。[结果]:继发性肺结核组中miRNA-451a及MMP-9的表达水平低于血行播散型结核病组及健康对照组的表达水平,而继发性肺结核组与血行播散型结核病组的MIF表达水平均高于健康对照组,差异具有统计学意义(P0.001)。在细胞模型中,miRNA-451 a表达水平升高会负向调控MIF基因的表达水平,同时细胞内MIF蛋白水平亦降低。另外,miRNA-451a表达较高的巨噬细胞吞噬细菌能力显著低于miRNA-451a表达较低的巨噬细胞,并且细胞内细菌存活率高于阴性对照,差异均具有统计学意义(P0.001)。[结论]:miRNA-451a通过负向调控其靶基因MIF的表达,减弱巨噬细胞抗结核分枝杆菌的活性,使结核分枝杆菌更容易逃脱巨噬细胞的免疫反应,并产生更严重的结核病临床类型。第二部分三种细胞因子在结核性胸水与恶性胸水中的诊断价值[目的]:分析结核性胸水与恶性胸水中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)、孤核受体α(RORα)和孤核受体γ(RORα)水平的差异,探讨其在肺结核和肺癌鉴别诊断中的价值。[方法]:选取已确诊为肺结核和肺癌的冻存胸水样本各80例,收集研究对象的基本信息,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各样本胸水中的MIF、ROR α及ROR γ水平,应用软件SPSS20.0进行对比分析。[结果]:结核组和肺癌组胸水中的MIF水平中位数(四分位数)[M(Q1～Q3)]分别为 5.83(2.41～16.43)、2.79(0.91～11.12)ng/L,差异有统计学意义(P0.01);结核组和肺癌组胸水中ROR α水平和ROR γ水平差异无统计学意义(P0.05)。[结论]:肺结核患者胸水中MIF水平高于肺癌患者,胸水中MIF水平对结核性胸水和恶性胸水的鉴别有一定诊断价值,ROR α及RORγ的鉴别诊断能力仍有待进一步验证。
【学位单位】：北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R52
【部分图文】：
的表达情况和差异，我们运用了实时荧光定量ＰＣＲ技术对三种基因进行相对定逡逑量分析。我们首先对各反应的扩增曲线以及溶解曲线进行了初步观察分析。其逡逑中一部分样本的扩增曲线和溶解曲线见图Ｉ和图２。由图中的溶解曲线可知，曲逡逑线呈现为独立的单峰，无其他杂峰或非特异性条带出现，表明该定量ＰＣＲ结果逡逑可靠准确，进行相对定量分析，其结果亦较准确。逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逦Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑？＇逦—￣逦W￣逡逑＾逦ｆ逦－逦／邋ＭＭＰ－９逡逑ｉ逦／逦＇逦５邋，，，ａ－Ｖ逡逑：＞00＜逦、．逦Ｉ逡逑ｃｃｔａｏ＊逦ｔｏｎｏｉ逡逑ＣＯｔｔｔＤ＇逦－邋－邋－邋—邋－逦Ｃ３ＸＭ＇逡逑ＣＷ逦ｃ？ｌ逡逑Ａ逦Ｂ逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑ｇａｐｄｈ／逡逑００１邋？逦／邋ＭＩＦ逡逑５邋１？逡逑瞻逦—Ｖ逡逑３００００１逡逑：sE逡逑Ｃｆ0ｅ逡逑Ｃ逡逑图ｉ三种基因的扩增曲线逡逑注：Ａ：ｍｉＲＮＡ－４５１ａ及其内参Ｕ６扩增曲线；Ｂ：ＭＭＰ－９及其内参ＧＡｒｏＨ扩增曲线；逡逑Ｃ：ＭＩＦ及其内参ＧＡＰＤＨ扩增曲线。逡逑２９逡逑
邋ｍｉＲＮＡ－４５１ａ在两种不同类型结核病与健康人情况和差异逡逑通过实时荧光定量ＰＣＲ技术，对不同类型肺结核患者及健康人ｉＲＮＡ－４５１ａ的表达水平进行相对定量分析。我们发现，健康人核病和继发性肺结核患者三组人群屮ｎｕＲＮＡ－４５ｌａ的表达情况．００１）。对结果进…步分析，发现继发性肺结核患者外周血中的表达情况明显低于健康人外周血中的ｍｉＲＮＡ邋？邋４５丨ａ表达情差异有统计学意义。另外，继发性肺结核患者外周血中的ｍｉＲＮＡ明显低于血行播散型结核病患者外周血中的ｍｉＲＮＡ－４５１ａ的水差异有统计学意义。然而，血行播散型结核病患者外周血的ｍｃｉｒ表达情况与健康人外周血■的ｍｉＲＮＡ邋－邋４５１ａ表达情况无明显差图邋３。逡逑
也明显高于健康人（Ｐ＝邋０．００１），差异具有统计学意义。然而血行播散型结核病逡逑患者外周血的ＭＩＦ表达情况与继发性肺结核患者之间无明显差异（Ｐ邋＝邋０．８３３）。逡逑见图４。逡逑ＭＩＦ逡逑逦＾逦逡逑S缅义希溴澹保埃у危浚垮危义希煎澹浚垮邋五义希掊澹浚垮危义希埃担危浚浚垮危海浚浚垮义希浚浚浚垮义希埃板澹叔五巍澹梢诲义贤迹村澹停保圃谌檠局械南喽员泶锼藉义献ⅲ河茫硎荆绣澹迹埃埃担挥茫硎荆绣澹迹埃埃保挥茫硎荆校迹埃埃埃薄ｅ义希矗玻玻冲危停停校澹乖诹街植煌嘈徒岷瞬∮虢】等巳褐械谋泶镥义锨榭龊筒钜戾义希停停校乖谌槿巳褐械谋泶锴榭鼍哂型臣蒲Р钜欤ǎ绣澹藉澹埃埃埃保＝徊椒皱义希常插义
本文编号：2834365
【学位单位】：北京市结核病胸部肿瘤研究所
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R52
【部分图文】：
的表达情况和差异，我们运用了实时荧光定量ＰＣＲ技术对三种基因进行相对定逡逑量分析。我们首先对各反应的扩增曲线以及溶解曲线进行了初步观察分析。其逡逑中一部分样本的扩增曲线和溶解曲线见图Ｉ和图２。由图中的溶解曲线可知，曲逡逑线呈现为独立的单峰，无其他杂峰或非特异性条带出现，表明该定量ＰＣＲ结果逡逑可靠准确，进行相对定量分析，其结果亦较准确。逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逦Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑？＇逦—￣逦W￣逡逑＾逦ｆ逦－逦／邋ＭＭＰ－９逡逑ｉ逦／逦＇逦５邋，，，ａ－Ｖ逡逑：＞00＜逦、．逦Ｉ逡逑ｃｃｔａｏ＊逦ｔｏｎｏｉ逡逑ＣＯｔｔｔＤ＇逦－邋－邋－邋—邋－逦Ｃ３ＸＭ＇逡逑ＣＷ逦ｃ？ｌ逡逑Ａ逦Ｂ逡逑Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋Ｐｌｏｔ逡逑ｇａｐｄｈ／逡逑００１邋？逦／邋ＭＩＦ逡逑５邋１？逡逑瞻逦—Ｖ逡逑３００００１逡逑：sE逡逑Ｃｆ0ｅ逡逑Ｃ逡逑图ｉ三种基因的扩增曲线逡逑注：Ａ：ｍｉＲＮＡ－４５１ａ及其内参Ｕ６扩增曲线；Ｂ：ＭＭＰ－９及其内参ＧＡｒｏＨ扩增曲线；逡逑Ｃ：ＭＩＦ及其内参ＧＡＰＤＨ扩增曲线。逡逑２９逡逑
邋ｍｉＲＮＡ－４５１ａ在两种不同类型结核病与健康人情况和差异逡逑通过实时荧光定量ＰＣＲ技术，对不同类型肺结核患者及健康人ｉＲＮＡ－４５１ａ的表达水平进行相对定量分析。我们发现，健康人核病和继发性肺结核患者三组人群屮ｎｕＲＮＡ－４５ｌａ的表达情况．００１）。对结果进…步分析，发现继发性肺结核患者外周血中的表达情况明显低于健康人外周血中的ｍｉＲＮＡ邋？邋４５丨ａ表达情差异有统计学意义。另外，继发性肺结核患者外周血中的ｍｉＲＮＡ明显低于血行播散型结核病患者外周血中的ｍｉＲＮＡ－４５１ａ的水差异有统计学意义。然而，血行播散型结核病患者外周血的ｍｃｉｒ表达情况与健康人外周血■的ｍｉＲＮＡ邋－邋４５１ａ表达情况无明显差图邋３。逡逑
也明显高于健康人（Ｐ＝邋０．００１），差异具有统计学意义。然而血行播散型结核病逡逑患者外周血的ＭＩＦ表达情况与继发性肺结核患者之间无明显差异（Ｐ邋＝邋０．８３３）。逡逑见图４。逡逑ＭＩＦ逡逑逦＾逦逡逑S缅义希溴澹保埃у危浚垮危义希煎澹浚垮邋五义希掊澹浚垮危义希埃担危浚浚垮危海浚浚垮义希浚浚浚垮义希埃板澹叔五巍澹梢诲义贤迹村澹停保圃谌檠局械南喽员泶锼藉义献ⅲ河茫硎荆绣澹迹埃埃担挥茫硎荆绣澹迹埃埃保挥茫硎荆校迹埃埃埃薄ｅ义希矗玻玻冲危停停校澹乖诹街植煌嘈徒岷瞬∮虢】等巳褐械谋泶镥义锨榭龊筒钜戾义希停停校乖谌槿巳褐械谋泶锴榭鼍哂型臣蒲Р钜欤ǎ绣澹藉澹埃埃埃保＝徊椒皱义希常插义
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