丙型肝炎病毒抗体阳性人群miR-134和miR-92a检测分析及评估

发布时间：2020-10-26 17:58

　　 目的:分析丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体阳性人群血清中miR-134和miR-92a表达水平的变化,并初步探讨miR-134和miR-92a检测在HCV感染诊断及疾病进展评估中的应用价值。方法:选取辽宁国际旅行卫生保健中心2016年1月至9月检测的丙型肝炎病毒抗体阳性体检者60例血清样本和60例健康对照者的血清样本。采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescencequantitative PCR)法对血清中miR-134和miR-92a的表达水平进行相对定量检测,分析其在Anti-HCV阳性组和健康对照组中的表达差异。结果:1.受检者基本参数分析显示,健康对照组和Anti-HCV阳性组在性别构成上的差异无统计学意义(P0.05);在年龄分布上,Anti-HCV阳性组平均年龄高于健康对照组平均年龄(P0.05);Anti-HCV阳性组ALT、HCV RNA定量水平均明显高于健康对照组,差异有统计学意义。2.实验得出,60各血清样本的总RNA浓度范围为24.8-44.6 ng/ul。为了得到相同的扩增效率,本实验将个样本总RNA浓度一致化,都调整到20ng/ul。3.通过文献查阅,可知血清miRNA定量检测所选的内参主要有两种,即U6和miR-16。两种内参基因表达都有高稳定性的特点,但有文献指出,在对照组和患病组中miR-16的表达有一定的变化。所以,本研究的内参选用U6,并对RNU6B表达的稳定性进行验证。验证得出,对照组与HCV抗体阳性组间U6 snRNA的Ct值未有明显差异(P=0.6530.05),结合相关文献资料~([1]),认为U6 snRNA可以作为该实验内参基因。4.Anti-HCV阳性组血清中miR-134和miR-92a的表达水平较健康对照组均有明显增加,而且差别有统计学意义(P=0.0120.05),可能是丙型肝炎病毒感染直接或间接促进了miR-134和miR-92a表达的上调。5.受试者工作特征曲线(receiver-operator characteristic curve,ROC)分析显示结果显示miR-134和miR-92a的AUC值分别为0.9867(95%CI:0.9724-1.001,P0.0001)和0.8931(95%CI:0.8365-0.9496,P0.0001);在临界值6.115×10~(-5)(miR-134)和4.231×10~(-2)(miR-92a)处,miR-134和miR-92a对丙型肝炎病毒感染的诊断灵敏度和特异度分别为80%、98.33%和61.67%、98.33%。miR-134和miR-92a作为HCV感染的血清学指标,具有潜在的诊断价值。6.通过SPSS20.0进行相关性统计分析显示,Anti-HCV阳性组血清中的miR-134和miR-92a之间存在明显正相关性:相关系数r=0.823,P=0.000(0.05)。7.miR-134与ALT无相关:r=0.203,P=0.119;miR-92a和ALT之间存在正相关性:r=0.341,P=0.0080.05;miR-134与HCV-RNA无相关:r=-0.015,P=0.909;miR-92a与HCV-RNA无相关:r=0.083,P=0.529。结论:1.与正常对照组相比,Anti-HCV阳性体检者血清中miR-134和miR-92a的表达水程度均有不同程度的增加,可能是丙型肝炎病毒感染直接或间接促使了miR-134和miR-92a的表达上调。2.ROC分析结果提示,miR-134和miR-92a可作为潜在的血清学诊断指标,在HCV检测方面有重要意义。3.相关性分析显示血清中miR-134和miR-92a之间的表达水平存在正相关;miR-92a与ALT表达水平存在正相关,miR-134与ALT及HCV RNA表达水平均未见明显相关性;而miR-92a与HCV RNA也未见明显相关性。表明血清中miR-134和miR-92a可能成为HCV感染的单独诊断及病程发展监控的指标。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R512.63
【部分图文】：

图 1Anti-HCV 阳性组和健康对照组 U6 snRNA 的 Ct 值读数明，对照组与 HCV 抗体阳性组间 U6 snRNA 的 Ct 值未有明5），结合相关文献资料[1]，认为 U6 snRNA 可以作为该实验内 miRNA 的表达水平。组 miR-134 和 miR-92a 表达水平比较-HCV 阳性组血清中 miR-134 和 miR-92a 的表达水平较健康对且差别有统计学意义（P=0.012<0.05），可能是丙型肝炎病了 miR-134 和 miR-92a 表达的上调(见图 2)。

图 1Anti-HCV 阳性组和健康对照组 U6 snRNA 的 Ct 值读数结果表明，对照组与 HCV 抗体阳性组间 U6 snRNA 的 Ct 值未有明显差异（53>0.05），结合相关文献资料[1]，认为 U6 snRNA 可以作为该实验内参基因不同靶 miRNA 的表达水平。）不同组 miR-134 和 miR-92a 表达水平比较Anti-HCV 阳性组血清中 miR-134 和 miR-92a 的表达水平较健康对照组均加，而且差别有统计学意义（P=0.012<0.05），可能是丙型肝炎病毒感染接促进了 miR-134 和 miR-92a 表达的上调(见图 2)。

大连医科大学硕士学位论文（五）miR-134 和 miR-92a 的 ROC 分析利用受试者工作特征曲线工具分析，可评估血清中 miR-134 和 miR-92a 是可作为潜在的丙型肝炎病毒感染血清学诊断指标。结果显示 miR-134 和 miR-9的 AUC 值分别为 0.9867（95%CI：0.9724-1.001，P<0.0001）和 0.8931（95%CI0.8365-0.9496，P<0.0001）；在临界值 6.115×10-5（miR-134）和 4.231×1（miR-92a）处，miR-134 和 miR-92a 对丙型肝炎病毒感染的诊断灵敏度和特异分别为 80%、98.33%和 61.67%、98.33%(图 3 中 miR-134 和 miR-92a 的 Identi数值相同均为 98.33，线条重合，miR-92a 的黑色 Identity 线被 miR-134 的绿Identity 线覆盖，未显现出)。二者作为 HCV 感染的血清学指标，具有潜在的诊价值。（见图 3）
【参考文献】

相关期刊论文 前7条

1 ;中国丙型肝炎流行病学状况与反思[J];临床合理用药杂志;2013年26期

2 梁秀清;李佳英;乌云斯琴;;ELISA法与2种GICA法检测丙型肝炎病毒抗体结果分析[J];疾病监测与控制;2010年09期

3 李卓;;HCV标志物及检测[J];中华检验医学杂志;2010年03期

4 Shashi Bala;Miguel Marcos;Gyongyi Szabo;;Emerging role of microRNAs in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2009年45期

5 ;MicroRNA signatures in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2009年14期

6 李成梅,郑继刚,杜桂森;miRNA:一种新的基因表达调节子[J];遗传;2004年01期

7 叶茂,陈跃磊,明镇寰;miRNA(microRNA)家族的研究进展[J];生物化学与生物物理进展;2003年03期

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1 张少波;病毒传染性疾病中miRNA的调控功能及诊断效能的研究[D];南方医科大学;2015年

本文编号：2857324