程序性坏死和凋亡在HBx诱导小鼠肝组织炎症损伤中的作用

发布时间：2020-10-29 23:27

　　 目的通过构建表达HBx基因的小鼠模型,评估HBx诱导肝组织炎症损伤的情况,分析程序性坏死和凋亡的作用,探讨HBx诱导小鼠肝组织炎症损伤的机制;用抗氧化剂NAC进行干预,分析NAC对HBx诱导的程序性坏死和凋亡的影响,探讨NAC对HBx诱导的小鼠肝组织炎症损伤的作用。方法(1)成年雄性ICR小鼠25只随机平均分成HBx组、Control组、payw1.2组、payw*7组和Mock组,将质粒pcDNA3.1-flag-HBx、pcDNA3.1、pGEM-HBV(payw1.2)、pGEM-HBV-?HBx(payw*7)和转染试剂通过尾静脉快速注射到小鼠体内,24h后眼眶取血并取肝组织,RT-PCR和Western blot检测肝组织中HBx mRNA和蛋白的表达情况,ELISA检测血清中HBsAg的表达情况,ELISA和qPCR分别检测血清和肝组织中TNF-α的表达情况,组织切片行HE染色观察肝脏的组织学形态,qPCR检测肝组织中RIP3、JNK、Bcl-2/Bax、Caspase8、Caspase3 mRNA的表达情况,Western blot检测肝组织中RIP3、JNK和磷酸化JNK蛋白的表达情况;(2)成年雄性ICR小鼠16只随机平均分成HBx组、HBx+NAC组、pc组和pc+NAC组,将质粒pcDNA3.1-flag-HBx、pcDNA3.1和转染试剂通过尾静脉快速注射到小鼠体内,干预组在转染前0.5h腹腔注射NAC,转染24h后取肝组织,RT-PCR检测肝组织中HBx mRNA的表达情况,qPCR检测肝组织中TNF-α、RIP3、JNK、Bcl-2/Bax、Caspase8、Caspase3 mRNA的表达情况。结果(1)RT-PCR和Western blot结果均显示HBx组肝组织中有HBx基因的表达;ELISA结果显示payw1.2组和payw*7组血清中均有HBsAg的表达,且payw1.2组较payw*7组有所上调(P0.05),HBx组血清中TNF-α的表达较Control组显著上调(P0.0001),payw1.2组与payw*7组无明显差异;qPCR结果显示HBx组肝组织中TNF-α、RIP3的表达较Control组明显上调(P0.01),JNK、Bcl-2的表达也有所上调(P0.05),Caspase8、Caspase3的表达下调(P0.05),Bax的表达无明显差异,payw1.2组肝组织中TNF-α、Bcl-2的表达较payw*7组上调(P0.05),RIP3、JNK、Bax、Caspase8、Caspase3的表达均无明显差异;组织切片HE染色结果显示除Control组外各组肝组织均有不同程度的病理学改变;Western blot结果显示HBx组肝组织中RIP3的表达较Control组明显上调(P0.01),JNK的表达水平无明显差异但磷酸化水平上调,payw1.2组与payw*7组的RIP3、JNK表达水平和JNK磷酸化水平均无明显差异;(2)RT-PCR结果显示HBx+NAC组和HBx组肝组织中均有HBx基因的表达;qPCR结果显示pc+NAC组肝组织中Bcl-2的表达较pc组明显上调(P0.01),Caspase3的表达显著下调(P0.001),TNF-α、RIP3、JNK、Bax、Caspase8的表达均无明显差异;HBx+NAC组肝组织中RIP3的表达较HBx组明显下调(P0.01),TNF-α、Bcl-2、Caspase3的表达也有所下调(P0.05),Bax的表达显著上调(P0.001),Caspase8的表达也有所上调(P0.05),JNK的表达无明显差异;HBx+NAC组肝组织中JNK、Bax的表达较pc+NAC组明显上调(P0.01),TNF-α、RIP3的表达也有所上调(P0.05),Bcl-2、Caspase8、Caspase3的表达均无明显差异。结论HBx可以促进HBV的复制,并通过诱导程序性坏死和抑制凋亡介导小鼠肝组织的炎症损伤;NAC可以抑制HBx诱导的程序性坏死,从而减轻小鼠肝组织的炎症损伤。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R575;R512.62
【部分图文】：

图 1.1 各组小鼠肝组织 HBx mRNA 表达情况织 HBx 蛋白表达情况ot 结果示，HBx 组、Control 组和 Mock 组内参 HBx 蛋白表达的条带，Control 组和 Mock 组图 1.2 各组小鼠肝组织 HBx 蛋白表达情况 HBsAg 表达情况示，payw1.2组与payw*7组均可检测到HBsAg

图 1.2 各组小鼠肝组织 HBx 蛋白表达情况3.3 小鼠血清 HBsAg 表达情况ELISA结果示，payw1.2组与payw*7组均可检测到HBsAg表达，且payw的表达水平较 payw*7 组上调，差异有统计学意义（*P<0.05）（见图 1.payw1.2payw*7010203040BHsAg(U/ml)payw1.2payw*7*

HBxControlpayw1.2payw*70.0000.0020.0040.006ReatilevmRNAevelJ(KN/βa-tcin)payw1.2payw*7图 2.6 各组小鼠肝组织 JNK mRNA 表达情况（2）Western blot 结果示，HBx 组、Control 组、payw1.2 组与 payw*7组小鼠肝组织中均可检测到 JNK 和磷酸化 JNK 表达，HBx 组 JNK 的表达水平较Control 组无明显差异，但磷酸化水平上调；payw1.2 组与 payw*7 组 JNK 的表达水平和磷酸化水平均无明显差异(见图 2.7）
【参考文献】

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本文编号：2861620