Linc00238在乙型肝炎病毒复制中的调控作用

发布时间：2020-11-15 20:54

　　 目的:探讨长链非编码RNA00238(long intergenic non-coding RNA00238,Linc00238)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期中的调控作用及可能的机制。方法:利用LincRNA芯片比较HBV阳性(HBV(+))与HBV阴性(HBV(-))肝组织样本中LincRNA表达差异,根据芯片结果,最终选择Linc00238为研究对象,real-time PCR验证Linc00238表达;利用过表达及RNA干扰,检测Linc00238对HBV复制、转录以及表达水平影响。利用双荧光素酶报告系统检测Linc00238对HBV启动子活性的影响。结果:LincRNA芯片在HBV(+)组织中共发现13条LincRNA表达发生变化,其中2条上调,11条下调,real-time PCR进一步证实Linc00238在HBV(+)肝组织样本中表达水平明显降低,在HBV稳定表达细胞系HepG2.2.15、HepAD38及HBV瞬时转染细胞模型中同样发现Linc00238表达下调,提示HBV感染抑制Linc00238表达。过表达Linc00238,HBV复制及蛋白表达水平明显减低,引入sh00238干扰Linc00238表达后,HBV复制及蛋白表达水平恢复(P0.05);双荧光素酶报告系统显示,HepG2细胞共转染pHBs-luc、pHBx-luc、pHBc-luc及pCDNA-linc00238后的报告荧光与对照组无明显差异(P0.05)。结论:通过体外研究发现Linc00238对HBV蛋白及DNA表达具有抑制作用,但研究进一步证实Linc00238不能通过影响HBV启动子活性抑制HBV表达与复制。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R512.62
【部分图文】：

a：ELISA 检测 HepAD38 细胞中转染 pCDNA-linc00238 后 HBsAg 水平；b:ELISA 检HepAD38 细胞中转染 pCDNA-linc00238 后 HBeAg 水平；c：Western blot 检测 HepAD3中转染 pCDNA-linc00238 后 HBc 水平。图 2-1 HepAD38 细胞过表达 Lnc00238 后 HBV 蛋白水平Figure2-1 HBV protein levels in HepAD38 cells up-regulated Linc002382.2 高表达 Linc00238 后抑制 HBV DNA 复制在 HepAD38 细胞中转染 pCDNA-Linc00238，HBV DNA 复制水平较对照显降低，HBV 复制中间体表达水平较对照组亦明显降低（图 2-2），结果证Linc00238 对 HBV DNA 复制具有抑制作用。

重庆医科大学硕士研究生学位论文2.3 干扰 Linc00238 作用后上调 HBV 蛋白表达水平在 HepAD38 细胞中过分别表达 Linc00238+sh-NC、Linc00238+sh-00238、pCDNA-NC+sh-00238、pCDNA-NC+sh-NC，用 ELISA 检测 HBs 及 HBe 表达，结果显示，过表达 Linc00238 后 HBV 蛋白表达水平得到抑制，而当干扰外源性Linc00238 表达后，HBV 蛋白水平得到部分恢复，差异具有统计学意义（P<0.05，图 2-3）。结果进一步明确，Linc00238 对 HBV 生活周期具有抑制作用
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本文编号：2885193