肝内胆管癌的抗病毒治疗及长链非编码RNA在肿瘤进展中的作用和机制

发布时间：2020-11-17 11:37

　　 第一部分肝内胆管癌的抗病毒治疗研究目的:乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)的重要危险因素,本研究拟评估抗病毒治疗(antiviral therapy,AVT)对合并HBV感染的ICC病人手术预后的影响。研究方法:回顾性的研究2006年至2011年,在上海东方肝胆外科医院和福建孟超肝胆外科医院接受肝切除治疗的928例合并HBV感染ICC病人的临床病理资料。详细记录病人的病毒再激活,肿瘤复发,肿瘤特异性生存和总体生存数据。生存率的分析使用时间依赖的Cox回归模型,以校正潜在协变量。结果:接受术前AVT,未接受术前AVT-低病毒载量(2000 IU/mL),以及未接受术前AVT-高病毒载量(≥2000 IU/mL)病人的术后病毒再激活率分别为3.3%,8.3%和15.7%(P0.001)。高病毒载量和病毒再激活是肿瘤复发(hazard ratio[HR]:1.22和1.34),肿瘤特异性生存(HR:1.36和1.46)和总体生存(HR:1.23和1.36)的独立危险因素。接受AVT治疗病人的术后5年肿瘤复发率,肿瘤特异性生存率和总体生存率(70.5%,46.9%和43.0%)优于未接受AVT-高病毒载量的病人(86.5%,20.9%和20.5%,所有P0.001);与未接受AVT-低病毒载量的病人无显著差异(71.7%,35.5%和33.5%,P=0.057,0.051和0.060)。同未接受AVT-高病毒载量的病人相比,无论是术前还是术后开始AVT治疗,均能改善病人的长期预后(肿瘤复发HR:0.44和0.54;肿瘤特异性生存HR:0.38和0.57;总体生存HR:0.46和0.54)。结论:病毒再激活影响合并HBV感染ICC病人的肝切除手术预后。AVT治疗可以降低病毒再激活率,改善高病毒载量病人的手术长期预后。第二部分长链非编码RNA在肝内胆管癌进展中的作用和机制研究目的:肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)的发病率和死亡率逐年升高,已成为研究热点。手术切除是唯一可能治愈ICC的治疗方式,但术后复发率高,远期疗效并不理想。由于ICC起病隐匿,早期无明显临床症状,病人发现时多处于晚期阶段,失去手术机会。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)长度大于200 bp,没有或仅有弱的蛋白编码能力。越来越多的证据表明,lnc RNA广泛参与细胞过程,包括表观遗传特征和基因表达的调控,但在ICC中却鲜有研究。本研究将探索lnc RNA在ICC肿瘤进展中的作用和机制,以期找到新的诊断标志物和治疗靶点。研究方法:通过基因芯片检测找出ICC癌和癌旁组织中差异表达的lnc RNA分子,结合高内涵增殖实验筛选,鉴定出增殖相关功能阳性目的基因。q PCR验证目的基因芯片检测结果,并进行大样本验证,分析目的基因的表达与病人临床病理特征及手术预后的关系。选择RBE细胞系作为工具细胞,短发卡RNA(short hairpin RNA,sh RNA)慢病毒敲减目的基因,观察目的基因改变对细胞凋亡,细胞周期和克隆形成能力的影响。裸鼠成瘤实验观察目的基因改变对QBC939细胞成瘤能力的影响。使用RNA荧光原位杂交技术及核质分离PCR对目的基因进行亚细胞定位。生物信息学预测目的基因可以靶定的微小RNA(micro RNA,mi RNA)及下游靶基因,双荧光素酶报告基因验证目的基因和靶基因之间的相互作用。结果:共7对ICC癌和癌旁组织用于基因芯片检测,发现113条lnc RNA分子在癌组织中高表达。在RBE细胞系中使用sh RNA慢病毒干扰目的基因,结合高内涵增殖实验筛选,找出一条与ICC增殖相关的lnc RNA,并将其命名为URICC(up regulated in intrahepatic cholangiocarcinoma)。对116例ICC病人的分析显示,URICC高表达的病人具有更高的血清糖链抗原19-9水平(58.8 vs.27.2 U/m L,P=0.030),更大的肿瘤直径(7.0 vs.6.1 cm,P=0.019),肿瘤数目多发者以及合并大血管侵犯者更多(50.0%vs.25.9%,P=0.007;25.9%vs.8.6%,P=0.014)。多因素Cox回归分析显示,URICC高表达是病人术后复发(hazard ratio[HR]:1.974,P=0.020)和总体生存(HR:1.796,P=0.047)的独立危险因素。干扰URICC的表达能够将细胞周期阻滞在G2/M期,促进细胞凋亡,抑制克隆形成。体内实验表明,干扰URICC的表达可减弱QBC939细胞的裸鼠皮下成瘤能力。双荧光素酶报告基因显示,URICC可以通过竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ce RNA)机制,解除mi R-320a对MCL-1的抑制,从而逃避线粒体途径的细胞凋亡。结论:URICC在ICC癌组织中高表达,干扰URICC可以抑制ICC细胞增殖。高表达URICC与病人差的预后显著相关。在机制上,URICC可以通过靶向结合mi R-320a,解除其对MCL-1的抑制,从而促进ICC的进展,是ICC的潜在治疗靶点和肿瘤标志物。
【学位单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R735.7;R512.62
【部分图文】：

- 1图 1. 研究流程图排除标准，仅按主要原因计；T，且 HBV-DNA< 2000 IU/mL；VT，且 HBV-DNA≥ 2000 IU/mL；T，且 HBV-DNA< 2000 IU/mL；T，且 HBV-DNA≥ 2000 IU/mL；始 AVT，且术后未中断。

图 2. 对于经肝切除治疗，接受 AVT，未接受 AVT 合并高病毒载量及未接受 AVT 合并低病毒载量病人的总体生存，肿瘤特异性生存和肿瘤复发。(A)：肿瘤复发；(B)：肿瘤特异性生存；(C)：总体生存。生存曲线使用时间依赖 Cox 回归方法绘制，校正了年龄，性别，糖链抗原 19-9，癌胚抗原，肿瘤直径，肿瘤数目，组织学亚型，淋巴结状态，直接侵犯，病毒再激活，肝切除术式和输血。校正的多因素分析结果显示，同 No-AVT-高病毒组相比，AVT 组和 No-AVT-低病

海军军医大学博士学位论文五、AVT 治疗开始时间对病人手术长期预后的影响在 AVT 组的 198 例病人中，有 87 例术前开始 AVT 治疗，并且肝切除术后均继续治疗 87 (术前加术后 AVT 组)；剩下的 111 例病人仅在肝切除术后接受 AVT 治疗 (术后 AVT 组)。No-AVT-高病毒组的 146 例病人也一起进行了分析 (图 1)。在图 3 中，术前加术后 AVT 组和术后 AVT 组病人具有相似的 Cox 校正 1-，3-，和 5-年肿瘤复发率 (23.3%，46.5%和 61.7% vs. 27.9%，52.4%和 67.2%，P = 0.330)，但均显著低于 No-AVT-高病毒组 (54.4%，75.9%和 84.5%；P<0.001，P=0.001)。术前加术后 AVT 组和术后 AVT 组病人相应的肿瘤特异性生存和总体生存也相似 (分别为 88.0%，66.4%和 57.7% vs. 78.7%，56.6%和 44.6%，P=0.088；82.8%，60.1%和52.0% vs. 79.2%，57.6%和 44.3%，P=0.468)。均显著高于 No-AVT-高病毒组 (67.5%，33.6%和 24.4%，P < 0.001，P = 0.008；66.0%，31.7%和 22.4%，P < 0.001，P = 0.003)。
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本文编号：2887459