广东省活禽市场状况调查及H3N2亚型流感病毒分子特征分析

发布时间：2020-11-21 06:53

　　 研究目的1.了解广东省H3N2亚型流感病毒的流行以及全基因组基因变异情况,并为广东省流感病毒监测防控提供参考意义,对H3N2的疫苗研制提供了理论依据。2.分析不同型别的禽流感病毒在活禽零售市场和批发市场市场的各类外环境标本和活禽肛咽拭子标本中的空间分布和时空分布,分析不同型别的禽流感病毒在各类标本中的污染情况。3.探究活禽市场从业人员针对不同型别的禽流感病毒的血清流行病学,了解不同型别的禽流感病毒在职业暴露人群中的感染情况。研究方法1.广东省H3N2亚型流感病毒基因序列研究采集2015年01月—2017年12月期间广东省流感监测哨点医院流感患者鼻咽拭子标本,利用鸡胚病毒分离法和MDCK细胞病毒分离法分离培养流感病毒。提取病毒核酸,检测出甲型流感阳性标本后,对其进行进一步的H3亚型特异检测。PCR法逆转录并扩增病毒,利用毛细管电泳法检测扩增条带,将得到目的条带的扩增产物进行序列测定及分析。2.广东省禽流感监测和职业暴露人群血清学研究采集2017年02月至2019年02月期间6个地市禽流感监测活禽市场外环境标本和活禽肛咽拭子标本,流感病毒鸡胚分离培养法分离培养禽流感病毒。提取病毒核酸,检测出甲型流感阳性标本后,进行H5、H7、H9亚型的特异性检测。对流行病学概况资料和核酸检测结果进行整理和分析;同时采集广东省6个地市职业暴露人群血清标本并进行问卷调查,利用哈兽维科禽流感病毒H5、H7、H9亚型血凝抑制试验抗原与阳性血清,对血清标本进行HA试验和HI试验。研究结果1.广东省H3N2亚型流感病毒基因序列中,2015—2017年12月分离株数目为17株,所占比重最高,其次为6月和7月。各地市间比较,清远、河源、中山、深圳占比重较高;各年龄组间进行比较,童年(0-6岁)与少年(7-17岁)人数较多,远高于其他组别;各性别组间比较,男性略高于女性。同时将60株分离株的HA、NA基因与2016—2018年和2015—2016年流感疫苗株的氨基酸位点相比发现,前者增加了多个氨基酸位点突变。会导致病毒对神经氨酸酶抑制剂的敏感性降低的NA氨基酸突变位点均未发生变异,提示2015年～2017年广东省分离株未产生耐药毒株,仍对奥司他韦等神经氨酸酶抑制剂敏感。与底物直接作用的抗原决定簇位点和对酶起催化作用的位点都没有发生位点突变,提示NA蛋白的酶活性中心保持高度的保守。2.广东省禽流感监测和职业暴露人群血清研究采集了2017年2月—2019年2月期间,阳江、广州、茂名、梅州、潮州、佛山6个地市共17个活禽贸易零售市场和活禽贸易批发市场的禽类泄殖腔拭子和咽拭子、各类外环境拭子,共计14958份标本。A型禽流感病毒阳性率与H9亚型禽流感病毒阳性率较其他亚型高,且变化趋势基本一致。6个地市之间的禽流感病毒阳性率有一定差异。各型别佛山的禽流感病毒阳性率均为最高。活禽批发市场A型、H5亚型、H7亚型、未分型禽流感病毒阳性率略高于活禽零售市场。活禽零售市场中佛山罗湖市场的A型禽流感病毒阳性率最高。活禽批发市场中佛山中南农产品交易中心的A型H5亚型、H9亚型、未分型禽流感病毒阳性率最高;阳江三鸟批发市场的H7亚型禽流感病毒阳性率最高;茂名茂南区袂花市场的各类型别禽流感病毒阳性率最低。职业暴露人群血清标本采集于2017年—2018年4月和10月分别在选定的活禽市场收集从业人员血清样本进行血清学调查,共采集547份血清标本,均为阴性。研究结论广东省H3N2亚型流感病毒基因序列研究显示H3N2亚型亚型流感呈双峰流行特点且未成年人易感。广东省2015优势流行株属3c.2a分支和3c.3a分支,2016年和2017年的优势流行株均属3c.2a分支,与我国整体优势进化分支情况相同。本研究发现2015—2017年间,我国甲型H3N2亚型流感病毒分离株间、分离株与疫苗株之间的同源性总体较高,但存在一定的差异且分支不够明确。本研究所涉及的60株分离株与2015—2016年和2016—2018年疫苗株相比,HA1区氨基酸位点变异数目分别为38和40,变异率分别为为11.55%和12.15%,共涉及A～E5个抗原表位区域。特别是多株分离株发生N121K和R142G/K位点突变,均属区域的关键氨基酸位点,表明H3N2亚型流感病毒有持续突变的趋势,与早期报道一致。与儿童高病死率相关的HA基因T128A位点,本研究表示未发生变异。因此,我们要密切关注H3N2亚型流感的关键氨基酸位点变异情况。H3N2亚型流感病毒在最近几年的致病性较其他亚型的流感要低,但其仍然具有引起高致病性大规模流行的可能。我们应加强和完善流感的预测系统,及时比对和分析病毒基因序列,掌握广东省A(H3N2)流感病毒的抗原性和基因特性变异情况,从而为研制疫苗提供重要的依据,及时防控流感病毒的传播与流行。广东省禽流感监测分析表明广东省活禽市场外环境中禽流感病毒污染情况不容乐观,且污染情况主要发生在流通环节;不同型别的禽流感病毒的分布具有季节性差异,甲型、H5、H7、H9及除H5/H7/H9亚型以外的其他亚型检出阳性率在冬春季较高。6个地市之间的禽流感病毒阳性率有一定差异,其中各型别佛山的禽流感病毒阳性率均为最高。自2017年秋季起,H7N9亚型禽流感病毒免疫工作的开展,可能是H7亚型禽流感病毒阳性检出率持续极低的最主要原因。绝大多数类型外环境标本和禽类肛咽拭子均检出禽流感病毒,A型禽流感病毒阳性检出率较高的有鸽笼擦拭标本、鹌鹑肛咽拭子、秤盘表面涂抹标本、运输车、地板擦拭标本、鸭肛咽拭子等,表明在禽类称重、运输等环节易造成污染,主要原因可能和不同类型外环境标本受禽类检查污染的严重程度不同有关。此次血清学调查中,针对H5、H7、H9亚型的HI试验结果结果均为阴性,提示无隐性感染者。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R511.7;R181.3
【部分图文】：

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本文编号：2892700