HIV-1感染者血浆外泌体对T细胞功能的调节作用及与CD4/CD8比值异常的关系
发布时间：2020-12-11 07:58
背景:接受长期有效cART后,HIV患者的CD4+T细胞数量可以恢复到350个/uL以上,CD4/CD8比值恢复正常。仍有部分CD4/CD8比值异常的患者,体内CD8+T细胞显示出更高的活化和衰老水平。本研究旨在探讨在接受长期有效ART治疗的HIV-1感染者血浆中血浆外泌体的动态变化、与患者CD4/CD8比值的相关性及其对T细胞功能的免疫调节作用。方法:本研究入组慢性HIV-1感染者21例,患者均为cART治疗后完全应答患者（Complete Responders,CRs）（接受cART治疗2年以上,病毒载量持续2年以上低于20拷贝/mL,现阶段CD4+T细胞计数>350个/uL）,根据患者CD4/CD8比值分为异常组和复常组,异常组（CD4/CD8<0.8）患者11例,复常组（CD4/CD8>0.8）患者10例;入组5例健康人作为对照（hea Ithy control,HC）。（1）比较三组人群中血浆外泌体的浓度变化,并分析其与CD4/CD8比值的相关性。（2）将患者的血浆外泌体与单一健康人的新鲜PBMC进行共培养,观察不同组别来源外泌体对CD8+T细胞分泌细胞因子...
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１血浆外泌体的鉴定??Ａ．血浆外泌体电镜下形态；Ｂ．血浆外泌体的粒径分布；Ｃ．血浆外泌体的ＷＢ鉴定，利用??Ｊｕｒｋａｔ细胞裂解所得蛋白作为对照
我们将ＣＤ４／ＣＤ８异常患者血浆与健康人ＰＢＭＣ在体外环境中共同培养，加入ＣＤ３??抗体和ＣＤ２８抗体进行活化刺激孵育４８小时，通过检测ＣＤ８＋Ｔ细胞上的ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ??的表达，以明确ＣＤ４／ＣＤ８异常患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞活化水平的影响。如图３．?Ａ??所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ８＋Ｔ细胞表面ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ的共??表达水平明显低于ＣＤ４／ＣＤ８复常患者（Ｐ?＝?０．００８）和ＨＣ对照组（Ｐ?＝?０．００１）。相关性??分析进一步显示，ＣＤ８＋Ｔ细胞的活化水平与患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相关（ｒ?＝?０．４７８，?Ｐ??＝０．０３９），与患者ＣＤ８计数水平呈负相关（ｒ?＝?－０．４７９，Ｐ?＝?０．０３８），与ＣＤ４计数水??平未发现相关性。??２．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌细胞因子的影响??我们观察了患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌细胞因子水平的影响，将患者血浆??与单一健康人ＰＢＭＣ在体外环境中共同培养，加入ＣＤ３抗体和ＣＤ２８抗体活化刺激孵育??４８小时，收获细胞前加入ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ，检测ＣＤ８＋Ｔ细胞内的ＩＦＮ－?ｙ、ＴＮＦ－?ａ和ＩＬ－２??水平。结果如图４所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌??ＩＦＮ－ｙ的能力弱于复常组（Ｐ?＝?〇．〇１２）和对照组（Ｐ〈?〇．〇〇１）
同组患者的外泌体会对其中的ＣＤ４＋Ｔ功能的影响。??１．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ４＋Ｔ细胞活化水平的影响??如图６所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ４＋Ｔ细胞表面??ＣＤ３８ＨＬＡ－ＤＲ＋的共表达水平明显低于复常组（Ｐ?＝?０．００８）和对照组（Ｐ?＝?０．００１）。相关??性分析进一步显示，ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化与患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相关（ｒ?＝?０．?５０７，?Ｐ?＝??０．?０２７），与患者ＣＤ８细胞计数呈负相关（ｒ?＝?－０．?５３１，Ｐ?＝?０．?０１９），与ＣＤ４细胞计数之??间未发现相关性。??２．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌细胞因子的影响??如图７所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌ＩＬ－２的能??力弱于复常组（Ｐ?＜?〇．?〇〇１）和ＨＣ对照组（Ｐ?＝?０．?００３），着提示ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌ＩＬ－２的??水平也会受到ＣＤ４／ＣＤ８异常患者的血浆外泌体的抑制性调节，且ＩＬ－２的分泌水平与??患者ＣＤ４／ＣＤ８比值之间有显著相关性（ｒ?＝?０．７７８，Ｐ〈?０．００１），与患者ＣＤ８细胞计数??间也存在显著相关性（ｒ?＝?－０．７３８，?Ｐ〈?０．００１），与ＣＤ４细胞计数之间未发现相关性。??另外
本文编号：2910167
【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１血浆外泌体的鉴定??Ａ．血浆外泌体电镜下形态；Ｂ．血浆外泌体的粒径分布；Ｃ．血浆外泌体的ＷＢ鉴定，利用??Ｊｕｒｋａｔ细胞裂解所得蛋白作为对照
我们将ＣＤ４／ＣＤ８异常患者血浆与健康人ＰＢＭＣ在体外环境中共同培养，加入ＣＤ３??抗体和ＣＤ２８抗体进行活化刺激孵育４８小时，通过检测ＣＤ８＋Ｔ细胞上的ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ??的表达，以明确ＣＤ４／ＣＤ８异常患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞活化水平的影响。如图３．?Ａ??所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ８＋Ｔ细胞表面ＣＤ３８和ＨＬＡ－ＤＲ的共??表达水平明显低于ＣＤ４／ＣＤ８复常患者（Ｐ?＝?０．００８）和ＨＣ对照组（Ｐ?＝?０．００１）。相关性??分析进一步显示，ＣＤ８＋Ｔ细胞的活化水平与患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相关（ｒ?＝?０．４７８，?Ｐ??＝０．０３９），与患者ＣＤ８计数水平呈负相关（ｒ?＝?－０．４７９，Ｐ?＝?０．０３８），与ＣＤ４计数水??平未发现相关性。??２．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌细胞因子的影响??我们观察了患者血浆外泌体对ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌细胞因子水平的影响，将患者血浆??与单一健康人ＰＢＭＣ在体外环境中共同培养，加入ＣＤ３抗体和ＣＤ２８抗体活化刺激孵育??４８小时，收获细胞前加入ＧｏｌｇｉＳｔｏｐ，检测ＣＤ８＋Ｔ细胞内的ＩＦＮ－?ｙ、ＴＮＦ－?ａ和ＩＬ－２??水平。结果如图４所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ８＋Ｔ细胞分泌??ＩＦＮ－ｙ的能力弱于复常组（Ｐ?＝?〇．〇１２）和对照组（Ｐ〈?〇．〇〇１）
同组患者的外泌体会对其中的ＣＤ４＋Ｔ功能的影响。??１．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ４＋Ｔ细胞活化水平的影响??如图６所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ４＋Ｔ细胞表面??ＣＤ３８ＨＬＡ－ＤＲ＋的共表达水平明显低于复常组（Ｐ?＝?０．００８）和对照组（Ｐ?＝?０．００１）。相关??性分析进一步显示，ＣＤ４＋Ｔ细胞的活化与患者ＣＤ４／ＣＤ８比值呈正相关（ｒ?＝?０．?５０７，?Ｐ?＝??０．?０２７），与患者ＣＤ８细胞计数呈负相关（ｒ?＝?－０．?５３１，Ｐ?＝?０．?０１９），与ＣＤ４细胞计数之??间未发现相关性。??２．?ＣＲ患者血浆外泌体对ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌细胞因子的影响??如图７所示，ＣＤ４／ＣＤ８异常组患者的血浆外泌体处理的ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌ＩＬ－２的能??力弱于复常组（Ｐ?＜?〇．?〇〇１）和ＨＣ对照组（Ｐ?＝?０．?００３），着提示ＣＤ４＋Ｔ细胞分泌ＩＬ－２的??水平也会受到ＣＤ４／ＣＤ８异常患者的血浆外泌体的抑制性调节，且ＩＬ－２的分泌水平与??患者ＣＤ４／ＣＤ８比值之间有显著相关性（ｒ?＝?０．７７８，Ｐ〈?０．００１），与患者ＣＤ８细胞计数??间也存在显著相关性（ｒ?＝?－０．７３８，?Ｐ〈?０．００１），与ＣＤ４细胞计数之间未发现相关性。??另外
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