HBx对小鼠肝细胞炎症损伤及线粒体功能影响的研究
发布时间：2021-04-10 10:34
研究目的:本实验室前期研究发现线粒体细胞色素C氧化酶亚单位III（cytochrome c oxidase subunit,COXIII）是乙型肝炎病毒x蛋白（hepatitis B virus x protein,HBx）的特异性结合蛋白,两者相互作用可诱发线粒体功能损伤,继而影响肝细胞的生物学功能。本研究拟采用流体动力学体内转染法构建表达HBx的小鼠模型,观察HBx造成小鼠肝细胞急性炎症损伤的情况,在动物模型层面上探讨HBx对肝细胞线粒体功能的影响,进一步阐明HBx诱发肝细胞炎症损伤的具体机制。研究方法:实验用清洁级成年雄性昆明小鼠（KM小鼠）30只随机分为实验组（pcDNA3.1-HBx质粒组）、空质粒对照组（pcDNA3.1质粒组）以及空白对照组（质粒溶媒剂组）。以构建好的pcDNA3.1-HBx质粒、pcDNA3.1质粒及质粒溶媒剂通过尾静脉分别高压注射进入各组小鼠体内,在第24小时处死,取小鼠肝组织以及经眼球采集血清。逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR）检测HBx基因mR...
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR检测各实验小鼠组肝组织中HBxmRNA的表达情况
讨 论病毒是一种小型的部分双链环状嗜肝 DNA 病毒，含有四由 x 基因编码为 x 蛋白被认为在慢性肝炎以及原发性肝癌要作用。HBx 是一种多功能蛋白，分子量大小约为 17kd，不仅具有广泛的反式激活功能，还能与宿主细胞内的蛋白控细胞的信号转导通路、细胞周期、细胞凋亡及氧化应激胞损伤，最终导致肝癌的发生。课题组前期已经成功建立了通过一系列的实验证实 HBx 在细胞内部的结合位点已经精在转染 HBx 的人正常肝细胞及肝癌细胞中高表达的 HBx图 1.2 Western blot 检测肝组织中 HBx 的表达情况1：空白对照组（质粒溶媒剂）2：空质粒对照组 3：HBx 实验组
24.小鼠血清中 IL-6、MDA 以及 SOD 含量的测定血清中炎症因子 IL-6 水平检测结果如图 2.2A 中所示，各组数据如表 2-1 所，统计学分析结果表明实验组与对照组血清中均有 IL-6 的表达，但实验组小鼠清中 IL-6 水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。血清中氧化应激关指标 MDA、SOD 水平检测结果如图 2.2（B、C）中所示，各组数据如表 2-1图 2.1 小鼠急性肝损伤的情况A：小鼠血清中 ALT 和 AST 水平检测值B：肝脏组织 HE 染色（40 X），箭头示肝细胞坏死区域Control：空白对照组 Mock：空载质粒对照组 HBx：实验组
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative damage in the progression of chronic liver disease to hepatocellular carcinoma:An intricate pathway[J]. Romilda Cardin,Marika Piciocchi,Marina Bortolami,Andromachi Kotsafti,Luisa Barzon,Enrico Lavezzo,Alessandro Sinigaglia,Kryssia Isabel Rodriguez-Castro,Massimo Rugge,Fabio Farinati. World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]表达HBVX基因的小鼠模型的建立及对肝细胞凋亡因子的影响[J]. 郭晨,李丹,林纳,黄月红,陈治新,王小众. 世界华人消化杂志. 2011(12)
[3]HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响[J]. 林纳,李丹,陈红英,陈治新,王小众. 细胞与分子免疫学杂志. 2008(10)
[4]2006年～2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划[J]. 中国实用乡村医生杂志. 2006(08)
本文编号：3129483
【文章来源】：福建医科大学福建省
【文章页数】：53 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT-PCR检测各实验小鼠组肝组织中HBxmRNA的表达情况
讨 论病毒是一种小型的部分双链环状嗜肝 DNA 病毒，含有四由 x 基因编码为 x 蛋白被认为在慢性肝炎以及原发性肝癌要作用。HBx 是一种多功能蛋白，分子量大小约为 17kd，不仅具有广泛的反式激活功能，还能与宿主细胞内的蛋白控细胞的信号转导通路、细胞周期、细胞凋亡及氧化应激胞损伤，最终导致肝癌的发生。课题组前期已经成功建立了通过一系列的实验证实 HBx 在细胞内部的结合位点已经精在转染 HBx 的人正常肝细胞及肝癌细胞中高表达的 HBx图 1.2 Western blot 检测肝组织中 HBx 的表达情况1：空白对照组（质粒溶媒剂）2：空质粒对照组 3：HBx 实验组
24.小鼠血清中 IL-6、MDA 以及 SOD 含量的测定血清中炎症因子 IL-6 水平检测结果如图 2.2A 中所示，各组数据如表 2-1 所，统计学分析结果表明实验组与对照组血清中均有 IL-6 的表达，但实验组小鼠清中 IL-6 水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。血清中氧化应激关指标 MDA、SOD 水平检测结果如图 2.2（B、C）中所示，各组数据如表 2-1图 2.1 小鼠急性肝损伤的情况A：小鼠血清中 ALT 和 AST 水平检测值B：肝脏组织 HE 染色（40 X），箭头示肝细胞坏死区域Control：空白对照组 Mock：空载质粒对照组 HBx：实验组
【参考文献】：
期刊论文
[1]Oxidative damage in the progression of chronic liver disease to hepatocellular carcinoma:An intricate pathway[J]. Romilda Cardin,Marika Piciocchi,Marina Bortolami,Andromachi Kotsafti,Luisa Barzon,Enrico Lavezzo,Alessandro Sinigaglia,Kryssia Isabel Rodriguez-Castro,Massimo Rugge,Fabio Farinati. World Journal of Gastroenterology. 2014(12)
[2]表达HBVX基因的小鼠模型的建立及对肝细胞凋亡因子的影响[J]. 郭晨,李丹,林纳,黄月红,陈治新,王小众. 世界华人消化杂志. 2011(12)
[3]HBV X基因对成人肝细胞HL-7702线粒体功能的影响[J]. 林纳,李丹,陈红英,陈治新,王小众. 细胞与分子免疫学杂志. 2008(10)
[4]2006年～2010年全国乙型病毒性肝炎防治规划[J]. 中国实用乡村医生杂志. 2006(08)
本文编号：3129483
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