NLRP3炎性小体复合物的组装在CVA16感染所致炎症中的作用分析

发布时间：2021-04-20 00:00

　　柯萨奇A组16型病毒（Coxsackievirus A16,CVA16）是小RNA病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病（Hand,foot,and mouth disease,HFMD）的主要致病原之一,其病毒颗粒为无包膜的对称球状颗粒。CVA16主要易感人群为0-5岁婴幼儿,患者出现的主要临床症状包括包括手足口部位疱疹、发热、急性咽峡炎等,重症患者出现以心、肺及神经系统为主的全身性炎症反应,其中神经源性肺水肿和肺出血是重症病例死亡的主要原因[1]。与肠道病毒71型（Enterovirus A 71,EVA71）相比,CVA16感染还具有反复性的特点,目前还未有能够防治其感染的疫苗出现。炎性小体（Inflammasome）是一组胞质蛋白复合物,它能够活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（Cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1）,从而促进白介素-1β（Interleukin 1 beta,IL-11β）和白介素-18（Interleukin 18,IL-18）的成熟和分泌[2,3]。NLRP3炎症小体是目前了解最深入的一种炎性... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1. 前言
    1.1 柯萨奇病毒A16型
    1.2 NLRP3炎性小体
    1.3 本课题研究意义、目的和基本策略
2. 材料及方法
    2.1 材料
        2.1.1 病毒
        2.1.2 细胞系
        2.1.3 常用试剂及抗体
        2.1.4 实验动物
        2.1.5 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 病毒培养
        2.2.3 细胞中NLRP3炎性小体激活情况的检测
        2.2.4 病毒感染的乳鼠体内NLRP3炎性小体激活情况的检测
        2.2.5 病毒感染的恒河猴体内NLRP3炎性小体激活情况的检测
3 结果与分析
    3.1 NLRP3炎性小体在不同细胞系中的表达情况
        3.1.1 NLRP3炎性小体基因表达的检测
        3.1.2 蛋白水平NLRP3炎性小体激活表征的检测
        3.1.3 分析
    3.2 CVA16病毒感染激活NLRP3炎性小体
        3.2.1 CVA16病毒感染Vero细胞系激活NLRP3炎性小体
        3.2.2 CVA16病毒感染KMB17细胞激活NLRP3炎性小体
        3.2.3 CVA16病毒感染SHSY5Y细胞激活NLRP3炎性小体
        3.2.4 NLRP3炎性小体在感染后的细胞中组装
        3.2.5 分析
    3.3 CVA16病毒感染BALB/C乳鼠中NLRP3炎性小体激活情况
        3.3.1 组织病毒载量的检测
        3.3.2 感染后恒河猴临床表现及组织病理
        3.3.3 NLRP3炎性小体激活情况检测
        3.3.4 乳鼠脑、肺组织中IL-1β的活化
        3.3.5 分析
    3.4 CVA16-EGFP病毒感染恒河猴
        3.4.1 CVA16-EGFP病毒鉴定
        3.4.2 临床表现及病毒血症
        3.4.3 分析
    3.5 恒河猴NLRP3炎性小体激活情况
        3.5.1 恒河猴PBMC中NLRP3炎性小体激活情况
        3.5.2 恒河猴脑、肺组织中NLRP3炎性小体激活情况
        3.5.3 分析
4. 讨论
参考文献
附录1: 英文缩略词表
致谢
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