miR-22靶向NLRP3在体外小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系中清除结核分枝杆菌

发布时间：2021-04-20 01:25

　　目的研究微小RNA-22（miR-22）靶向核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）在巨噬细胞RAW264.7清除结核分枝杆菌（MTB）中的作用。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,分为miR-22 mimic+NLRP3-WT组、miR-22 NC+NLRP3-WT组、miR-22 mimic+NLRP3-MUT组和miR-22 NC+NLRP3-MUT组。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-22与NLRP3基因的靶向关系。采用MTB标准菌株H37Rv感染RAW264.7巨噬细胞,分为NC组（正常生长RAW264.7巨噬细胞）、H37Rv组（感染H37Rv的RAW264.7巨噬细胞）、H37Rv+mimic NC组（H37Rv组基础上转染miR-22 mimic NC序列）和H37Rv+mimic组（H37Rv组基础上转染miR-22 mimic序列）,采用流式细胞仪检测RAW264.7巨噬细胞微管相关蛋白轻链3-II（LC3-II）+、MTB抗原Ag85A⁺（Ag85A⁺）;采用实时定量PCR（RT-qPCR）检测RAW264... 

【文章来源】：免疫学杂志. 2020,36(12)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要试剂与仪器
    1.2 细胞培养
    1.3 双荧光素酶报告基因实验
    1.4 MTB感染及分组
    1.5 流式细胞仪检测LC3-Ⅱ+细胞、Ag85A+细胞
    1.6 各组RAW264.7巨噬细胞中mi R-22、NLRP3m RNA水平检测
    1.7 免疫印迹法（Western blot,WB）检测各组RAW264.7巨噬细胞中NLRP3、caspase-1蛋白表达
    1.8 各组RAW264.7巨噬细胞上清液中IL-1β、IL-18水平检测
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 mi R-22与NLRP3基因靶向关系验证
    2.2 各组RAW264.7巨噬细胞LC3-II+细胞、Ag85A+细胞比例
    2.3 各组RAW264.7巨噬细胞中mi R-22、NLRP3m RNA水平比较
    2.4 各组RAW264.7巨噬细胞中NLRP3、caspase-1蛋白水平比较
    2.5 RAW264.7巨噬细胞上清液中IL-1β、IL-18水平比较
3 讨论



本文编号：3148702