HBV感染引起的肝癌中HBV cccDNA与AP0BEC3的相关性研究

发布时间：2017-04-21 11:17

  本文关键词：HBV感染引起的肝癌中HBV cccDNA与AP0BEC3的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒持续感染的关键因子,为了研究肝癌发生过程中宿主对病毒cccDNA的调控,我们检测了HCC样本中配对的癌组织和癌旁组织中HBVcccDNA的表达水平,并进一步分析了宿主抗病毒因子APOBEC家族基因与HBV cccDNA的相关性。方法：首先通过特异性荧光定量PCR方法检测了49例配对的癌组织及癌旁组织中肝脏内HBV cccDNA和HBV total DNA的表达水平,并用配对秩和检验的方式分析其表达差异；然后应用滚环扩增技术特异性扩增这49对癌组织及癌旁组织中肝脏内HBV cccDNA,测序后分析HBV基因组的4个编码调控区域preC/C,RT,X, preS中病毒cccDNA发生的突变,进一步应用3D-PCR深入比较癌组织和癌旁组织中cccDNA发生的G-A突变。通过RT-qPCR检测了APOBEC3B家族在这49对癌组织及癌旁组织中肝脏内的表达差异,并通过Western Blot进行验证。最后在细胞体系中,HepAD38细胞中过表达APOBEC3B质粒,研究其对cccDNA潜在的抑制作用。结果：在49例患者中,在35例配对的癌组织和癌旁组织都检测到了cccDNA,癌组织HBV cccDNA平均表达水平显著低于癌旁组织中(p=0.003),同时肝脏内HBV cccDNA与HBV total DNA的表达水平呈正相关性。通过滚环扩增,我们分析了HBV cccDNA编码preC/C和X区,发生G-A的突变最高,进一步用3D-PCR发现癌组织cccDNA的preC/C区主要发生G-A突变,突变率高于癌旁组织(3.9/1000bp vs 0.12/1000bp),并且更多的G-A突变发生于GpA二联核苷酸形式,表明APOBEC3可能参与了HCC中cccDNA的剪切和降解。最后我们分析了APOBEC3家族7个基因在肿瘤组织和癌旁组织中的转录水平：APOBEC3A、APOBEC3B和APOBEC3D在癌组织中上调,而APOBEC3C、APOBEC3F、APOBEC3G和APOBEC3H在癌组织下调,其中APOBEC3B在癌组织的表达上调具有显著性差异(P0.05)。HepAD38细胞中过表达APOBEC3B,通过特异性荧光定量发现相对于对照组,转染APOBEC3B表达质粒后,其HBVcccDNA水平降低,APOBEC3B对HBV cccDNA抑制率到达42.1%。结论：肿瘤中HBV cccDNA表达水平发生明显降低,同时发生了较多的G-A突变,这种变化可能是由于肿瘤中APOBEC3B基因表达上调引起。
【关键词】：乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3家族 G-A突变
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62;R735.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-13
• 1 材料与仪器13-15
• 2. 方法15-29
• 3. 结果29-39
• 4 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-48
• 文献综述：APOBEC3在抗HBV感染中的机制和作用48-57
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间撰写和发表的论文58

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本文编号：320229