乙型肝炎病毒重组酶聚合酶等温扩增闭管可视化检测方法及装置

发布时间：2021-06-16 21:59

　　目的重组酶聚合酶扩增技术（RPA）的传统检测方法因操作繁琐等因素,不适于现场快速检测。以乙型肝炎病毒（HBV）核酸检测为例,建立了一种基于重组酶聚合酶扩增技术（RPA）的HBV核酸等温扩增检测方法并设计了配套的RPA产物可视化检测装置。方法首先设计了可用手机拍照采集图像并经肉眼可视化判读检测结果的RPA产物检测装置;然后根据HBV基因保守序列设计RPA引物及探针,通过监测RPA反应的实时荧光曲线来比较各引物对的扩增效率来筛选最佳引物对并优化最适的反应条件,采用人工合成的HBV靶标质粒考察可视化检测的灵敏度,并通过检测人工合成的包含丙肝病毒、人免疫缺陷病毒、梅毒螺旋体、流感病毒、人乳头瘤病毒核酸片段的质粒来考察了方法的特异性;通过与实时荧光扩增曲线进行对比,验证了RPA产物可视化检测装置的可行性;最终对20份经实时荧光PCR检测过的血清DNA样本进行RPA可视化检测来评价方法对临床实际样本检测的适用性。结果采用RPA产物可视化检测装置实现了手机拍照肉眼观察即可判定检测结果的阴阳性信号,HBV核酸RPA扩增可视化检测方法可在39℃30 min内实现对低至1-10拷贝HBV DNA靶标的可视... 

【文章来源】：医学研究生学报. 2020,33(05)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

10例血清DNA样本的RPA检测结果

HBV-RPA扩增方法灵敏度检测结果

便携式RPA产物可视化检测装置为一小体积暗盒(长、宽、高分别为112、90、100 mm),盒内设置有两个包含(470±20) nm滤光片的LED激发光源,暗盒顶部设计有一个带有(520±10) nm滤光片的信号采集窗口,将RPA扩增30 min后的反应管放置在暗盒底部,用手机在信号采集窗口拍摄反应管内的荧光信号即可实现对RPA检测结果的肉眼可视化判读,并可通过荧光灰度值(ImageJ软件分析)对检测结果进行进一步的分析。整个装置由锂电池充电宝供电,便于现场使用。见图1。1.2.2 RPA扩增体系的配制

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3233866