感染早期激活肝内TLR3通路对HBV感染结局的影响及其机制

发布时间：2021-08-02 13:28

　　目的探索在HBV感染早期,激活肝内TLR3/IFN信号通路对感染结局的影响及其可能的机制,为阐明少数成年人感染乙肝病毒后发展为慢性感染的原因提供可能的实验和理论依据。方法1.PAAV-HBV1.2质粒与Poly（I:C）/生理盐水（NS）一同以尾静脉高压水注射的方式导入8周龄,雄性,野生型BALB/C小鼠体内。2.小鼠尾静脉高压水注射PAAV-HBV1.2质粒10天后,再以尾静脉高压水注射的方式将Poly（I:C）/NS导入BALB/C小鼠体内。3.按既定时间点采集血清样本和肝脾组织样本。4.用ELISA的方法检测小鼠血清HBs Ag和HBe Ag的水平;用Real-Time PCR的方法检测血清和肝组织中HBV的病毒滴度;用免疫组织化学的方法检测肝细胞内HBc Ag的表达;5.分离肝内浸润淋巴细胞（LILs）,用ELISPOT的方法检测特异性分泌IFN-γ的淋巴细胞数。6.抽提肝组织的总RNA,Real-Time RT-PCR检测CD3、CD4、CD8、IL-6、IL-10、TGF-β、IFN-β、IFN-γ、ISG15、IP-10、PDL-1、IRF3、OAS、Perf、Fox P... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

HBV感染早期注射Poly(I:C)阻碍HBV的清除PAAV-HBV1.2质粒与Poly(I:C)/NS，一同以尾静脉高压水注射的方式导入8周龄，雄性，野生型BALB/C小鼠体内

图 3. HBV 感染早期注射 Poly(I:C)抑制 HBV 特异性 T 细胞应答PAAV-HBV1.2 质粒与 Poly(I:C) /NS，一同以尾静脉高压水注射的方式导入 8 周龄，雄性，野生型 BALB/C 小鼠体内。注射第 15 天分离小鼠的肝内浸润淋巴细胞，在各反应孔中加入 5×105个细胞，给予 rHBsAg、rHBcAg 和 CMV 刺激，不加刺激物的孔为阴性对照，加入 ConA 刺激物的孔作为阳性对照，ELISPOT 检测淋巴细胞中 rHBsAg、rHBcAg 特异性分泌 IFN-γ的细胞数。（图3.A）。注射后第 1 天和第 15 天，分离小鼠的 NPC 和脾细胞，用 CD4 和 CD8 流式抗体细胞分子表面染色，流式细胞术检测肝脾内 CD4+和 CD8+T 细胞的数量（图 3.B）。实验重复 2-3 次，每组至少 4 只小鼠。*表示有显著性差异（p 值≤0.05），**表示有显著性差异（p 值≤0.01）。3. HBV 感染早期注射 Poly(I:C)对肝内细胞因子表达水平的影响为了探索 HBV 感染早期 Poly(I:C)对肝内细胞因子表达水平的影响。以尾静脉高压水注射的方式将 PAAV-HBV1.2 质粒及 Poly(I:C)/NS 导入小鼠体内，Real timeRT-PCR 检测肝内细胞因子的表达水平。结果如图 4 所示，Poly(I:C)处理组的肝组织IFN- 、IP10、OAS 和 ISG15 mRNA 的表达水平在注射后第 1 天上调，IL-10 mRNA

- 46 -图 4. HBV 感染早期注射 Poly(I:C)对肝内细胞因子表达水平的影响PAAV-HBV1.2 质粒与 Poly(I:C) /NS，一同以尾静脉高压水注射的方式导入 8 周龄，雄性，野生型 BALB/C 小鼠体内。注射后第 1、4、10、20、30、40 和 60 天处死小鼠，取小鼠的肝组织并抽提 RNA。Real-time RT-PCR 定量检测 CD3、CD4、CD8、 IL-6、IL-10、TGF-β、IFN-β、IFN-γ、


本文编号：3317649