云南鼠疫自然疫源地野外小型兽类嗜吞噬细胞无形体感染调查
发布时间：2021-08-26 11:14
目的明确云南鼠疫自然疫源地野外小型兽类自然感染嗜吞噬细胞无形体状况及多种因素对野外小型兽类感染嗜吞噬细胞无形体的影响,探讨云南鼠疫自然疫源地嗜吞噬细胞无形体流行株基因多态性,为疾病防控提供科学依据。方法1.样本来源本研究于云南鼠疫自然疫源地捕获野外小型兽类2611只,对捕获的野外小型兽类进行肝、脾脏器样本采集,共获得2549份肝、脾脏器样本,通过分层抽样,1605份样本作为本次实验检测对象。2.DNA提取按照磁珠法微量细胞/组织基因组DNA提取试剂盒说明书的操作步骤对野外小型兽类肝、脾脏器样本进行DNA提取,通过核酸浓度测定仪NanoDrop-1000对提取的样本DNA进行检测,不符合标准的样本DNA重新进行提取,对符合标准的样本DNA进行PCR扩增。3.PCR扩增采用巢式PCR进行嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因片段扩增,采用实时荧光定量PCR进行嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段扩增。4.基因序列测定和系统进化树分析将测序成功的样本基因序列片段通过登陆网站（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov）利用BLAST中的“Sequence Similarity Se...
【文章来源】：大理大学云南省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
云南鼠疫自然疫源地采样点分布图
材料与方法4.4.2 实时荧光定量 PCR 结果判定将嗜吞噬细胞无形体质粒标准品进行 10 倍浓度稀释（100～106拷贝数/uL），通过 6 次重复实验（每次实验各浓度设置 6 个平行孔），分析实验结果并制成标准曲线，确定拷贝数最低且稳定的 Cq 值定为检测阈值。本实验采用栗冬梅等[51]的测定结果，将检测阈值定于 Cq＜35（100 拷贝数/uL）。当被测样本 Cq 值均数小于 35 且平行孔扩增结果差异小，扩增结果图中阳性对照起峰而空白对照未起峰时（见图 3），结果判定为疑似阳性，并送至测序公司进行测序；为防止污染造成的假阳性结果，反应体系配置，PCR 扩增在不同区域进行。
扩增产物长度为 389bp；对扩增产物进行 1.5%琼脂糖凝胶电泳，出现目的条带的位置符合预计位置（见图4 和图 5）。注：Marker 分子量为 700bp，自上而下依次为 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 为 DNAMarker ；PC 为阳性对照 ；NC 为阴性对照；YL-3-131 至 LH-4-165 号为阳性扩增产物。图 4 嗜吞噬细胞无形体巢式 PCR 第一轮扩增结果注：Marker 分子量为 700bp，自上而下依次为 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 为 DNAmarker ；PC 为阳性对照 ；NC 为阴性对照；YL-3-131 至 LH-4-165 号为阳性扩增产物。图 5 嗜吞噬细胞无形体巢式 PCR 第二轮扩增结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用TaqMan探针实时荧光定量PCR法调查北京市部分城郊区鼠传病原体流行状况[J]. 栗冬梅,徐兆楠,朱彩英,张政,康央,张洪江,宋秀平,唐承军,葛军旗. 中国媒介生物学及控制杂志. 2019(01)
[2]中国人粒细胞无形体病流行现状及其影响因素[J]. 张宏泽,尹家祥. 中国人兽共患病学报. 2018(05)
[3]嗜吞噬细胞无形体病分子生物学诊断方法的研究进展[J]. 李红旺,刘士煌,吴保义,金春梅,于龙政. 吉林畜牧兽医. 2017(07)
[4]云南省玉龙鼠疫疫源地蚤类群落结构与物种多样性[J]. 汤丽,张长国,邵宗体,段兴德,浦恩念,刘正祥,苏超,宋志忠,高子厚. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(03)
[5]嗜吞噬细胞无形体在不同组织细胞间抗原差异研究[J]. 高娃,殷旭红,郭生春,乌兰图雅,曹民治. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(03)
[6]北京东北部山区人群嗜吞噬细胞无形体血清流行病学调查[J]. 吕燕宁,窦相峰,陈丽娟,孙玉兰,张秀春,关增智,黎新宇,王全意. 中国人兽共患病学报. 2016(10)
[7]山东沂源硬蜱携带无形体的调查及进化分析[J]. 刘相叶,武志强,刘转转,汤仁仙,颜超,郑葵阳. 动物医学进展. 2015(12)
[8]云南省鼠疫自然疫源地研究现况[J]. 魏兆飞,尹家祥. 疾病预防控制通报. 2015(06)
[9]嗜吞噬细胞无形体对宿主细胞影响研究进展[J]. 张艳,宁长申. 动物医学进展. 2015(05)
[10]吉林省延边地区自然生境内蜱种类的调查[J]. 于龙政,海旭南,许应天,崔明勋,梁晚枫,金春梅,张守发. 国际医学寄生虫病杂志. 2015 (01)
博士论文
[1]嗜吞噬细胞无形体及其复合感染的调查与实验研究[D]. 崔晓鸣.中国人民解放军军事医学科学院 2016
硕士论文
[1]三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究[D]. 姚娜.石河子大学 2013
本文编号：3364138
【文章来源】：大理大学云南省
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
云南鼠疫自然疫源地采样点分布图
材料与方法4.4.2 实时荧光定量 PCR 结果判定将嗜吞噬细胞无形体质粒标准品进行 10 倍浓度稀释（100～106拷贝数/uL），通过 6 次重复实验（每次实验各浓度设置 6 个平行孔），分析实验结果并制成标准曲线，确定拷贝数最低且稳定的 Cq 值定为检测阈值。本实验采用栗冬梅等[51]的测定结果，将检测阈值定于 Cq＜35（100 拷贝数/uL）。当被测样本 Cq 值均数小于 35 且平行孔扩增结果差异小，扩增结果图中阳性对照起峰而空白对照未起峰时（见图 3），结果判定为疑似阳性，并送至测序公司进行测序；为防止污染造成的假阳性结果，反应体系配置，PCR 扩增在不同区域进行。
扩增产物长度为 389bp；对扩增产物进行 1.5%琼脂糖凝胶电泳，出现目的条带的位置符合预计位置（见图4 和图 5）。注：Marker 分子量为 700bp，自上而下依次为 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 为 DNAMarker ；PC 为阳性对照 ；NC 为阴性对照；YL-3-131 至 LH-4-165 号为阳性扩增产物。图 4 嗜吞噬细胞无形体巢式 PCR 第一轮扩增结果注：Marker 分子量为 700bp，自上而下依次为 700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；M 为 DNAmarker ；PC 为阳性对照 ；NC 为阴性对照；YL-3-131 至 LH-4-165 号为阳性扩增产物。图 5 嗜吞噬细胞无形体巢式 PCR 第二轮扩增结果
【参考文献】：
期刊论文
[1]应用TaqMan探针实时荧光定量PCR法调查北京市部分城郊区鼠传病原体流行状况[J]. 栗冬梅,徐兆楠,朱彩英,张政,康央,张洪江,宋秀平,唐承军,葛军旗. 中国媒介生物学及控制杂志. 2019(01)
[2]中国人粒细胞无形体病流行现状及其影响因素[J]. 张宏泽,尹家祥. 中国人兽共患病学报. 2018(05)
[3]嗜吞噬细胞无形体病分子生物学诊断方法的研究进展[J]. 李红旺,刘士煌,吴保义,金春梅,于龙政. 吉林畜牧兽医. 2017(07)
[4]云南省玉龙鼠疫疫源地蚤类群落结构与物种多样性[J]. 汤丽,张长国,邵宗体,段兴德,浦恩念,刘正祥,苏超,宋志忠,高子厚. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(03)
[5]嗜吞噬细胞无形体在不同组织细胞间抗原差异研究[J]. 高娃,殷旭红,郭生春,乌兰图雅,曹民治. 中国媒介生物学及控制杂志. 2017(03)
[6]北京东北部山区人群嗜吞噬细胞无形体血清流行病学调查[J]. 吕燕宁,窦相峰,陈丽娟,孙玉兰,张秀春,关增智,黎新宇,王全意. 中国人兽共患病学报. 2016(10)
[7]山东沂源硬蜱携带无形体的调查及进化分析[J]. 刘相叶,武志强,刘转转,汤仁仙,颜超,郑葵阳. 动物医学进展. 2015(12)
[8]云南省鼠疫自然疫源地研究现况[J]. 魏兆飞,尹家祥. 疾病预防控制通报. 2015(06)
[9]嗜吞噬细胞无形体对宿主细胞影响研究进展[J]. 张艳,宁长申. 动物医学进展. 2015(05)
[10]吉林省延边地区自然生境内蜱种类的调查[J]. 于龙政,海旭南,许应天,崔明勋,梁晚枫,金春梅,张守发. 国际医学寄生虫病杂志. 2015 (01)
博士论文
[1]嗜吞噬细胞无形体及其复合感染的调查与实验研究[D]. 崔晓鸣.中国人民解放军军事医学科学院 2016
硕士论文
[1]三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究[D]. 姚娜.石河子大学 2013
本文编号：3364138
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