朊病毒感染后神经细胞分泌tau蛋白含量变化的研究

发布时间：2021-10-29 09:33

　　朊病毒病是一类潜伏期长,可影响多种哺乳动物包括人类的神经退行性疾病,死亡率为100%。Tau蛋白作为一种胞内微管相关蛋白,在多种神经退行性疾病患者脑脊液中显著升高。近年来研究显示神经细胞和非神经细胞能够特异性分泌tau蛋白。这些研究提示患有神经退行性疾病后,细胞可能存在tau蛋白的非常规分泌。但在朊病毒疾病中tau蛋白的分泌情况还未有报道。为了探究朊病毒感染后总tau蛋白的分泌情况,利用朊病毒感染的SMB-S15细胞和其对照细胞系SMB-PS,通过ELISA和Western blot方法检测了细胞裂解液和培养液中总tau蛋白含量。ELISA结果显示与SMB-PS细胞相比,SMB-S15细胞培养液中总tau蛋白含量显著升高。Western blot结果显示与SMB-PS相比,SMB-S15细胞裂解液中总tau蛋白含量显著升高;SMB-PS和SMB-S15细胞培养液中均存在总tau蛋白阳性条带,经与裂解液中总tau蛋白归一化后,SMB-S15细胞培养液中总tau蛋白含量显著高于SMB-PS细胞,再次印证ELISA结果。本研究自行制备了四支抗tau蛋白外显子2和10的单克隆抗体（anti-t... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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朊病毒病的神经病理学现象[10]

文献综述5图1-2PrPC蛋白结构模式图Figure1-2StructurepatternofPrPC注：A.PrPC蛋白一级结构模式图[17]；B.PrPC蛋白三级结构模式图[18]Notes:A.PrimarystructureofPrPC;B.TertiarystructureofPrPCPrPC蛋白的生物学功能丰富繁杂。其中一项为涉及细胞信号转导。由于PrPC由GPI锚锚定在细胞膜上并没有直接进入细胞，所以PrPC不能直接调控信号的传导，而是需要与其它蛋白相互作用来完成。研究显示PrPC蛋白可与多种分子相互作用包括神经细胞粘附分子（nervecelladhesionmolecules,NCAM）[19,20]、应激诱导蛋白（stressinducibleprotein1,STI-1）[21-24]、层粘连蛋白[25,26]、小窝蛋白[27]等。在这些候选分子中神经细胞粘附分子是目前观察到的与PrPC蛋白相互作用可能性最大的蛋白。PrPC和神经细胞粘附分子之间的相互作用可以促进神经细胞粘附分子向脂质筏募集，从而激活位于膜上的Fyn激酶并诱导神经发生[28]。此外，另一项研究表明在神经细胞黏附分子的辅助下，PrPC蛋白在神经元分化中有着重要作用[29]。也有研究表明PrPC在预防压力，尤其是氧化应激和某些细胞凋亡应激方面具有一定作用[30-32]。Bcl-2家族促凋亡蛋白Bax的过表达会引起人胚胎神经元发生凋亡。然而，当Bax和PrPC共转染时几乎可以使所有细胞免于凋亡。此外当人乳腺瘤细胞MCF-7AB

Х绞降拇?怼４送釶rP蛋白本身具有毒性区域（PrP106-126），在正常细胞内PrPC蛋白的水解位点正位于此，因此经过胞内酶切后能够形成无毒的可溶的C1片段。与PrPC蛋白相比，PrPSc蛋白的水解位点更靠近N-端，因此机体中PrP蛋白的毒性部分被完整地保留了下来，该毒性片段在细胞内不能够被酶解，可能造成细胞稳态的改变[37]。在体外，PrPC经蛋白酶K消化后，能够被完全酶解，经Westernblot检测后，PrP信号完全消失。而PrPSc能够抵抗蛋白酶K的消化，不能被蛋白酶K完全降解，经Westernblot检测后，信号条带较消化前略有下移[38,39]。图1-3PrPSc蛋白的理化性质[38]Figure1-3PhysicalandchemicalpropertiesofPrPSc1.2.3PrPC转变为PrPSc的作用机制机体中正常生理状态的PrPC蛋白在空间结构上转变为PrPSc，脑组织中出现大量的PrPSc的聚集进而引起神经病理学改变被认为是朊病毒致病的关键步骤[40]。因为PrPC和PrPSc一级结构的氨基酸序列以及抗原决定簇等免疫学性质高度相似，所以至今无法获得高度纯化PrPSc蛋白，进行分子学研究。因此无法开展关于PrPC向PrPSc


本文编号：3464429