三种虫媒病毒一步法荧光定量RT-PCR检测技术的建立

发布时间：2017-05-05 22:12

  本文关键词：三种虫媒病毒一步法荧光定量RT-PCR检测技术的建立，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：虫媒病毒(Arbovirus)是一类以吸血昆虫为传播媒介的病毒,通过吸血昆虫叮咬人、家畜及野生动物而传播疾病,具有自然疫源性。该类病毒能引起烈性的人兽共患病,导致大量人畜患病或死亡,造成巨大经济损失的同时也严重威胁公共卫生安全。病原生态学及流行病学研究数据显示,我国目前存在为数众多的虫媒病毒,为有效开展虫媒病毒病的侦检,进而在我国防控该类疫病的发生和流行,建立早期的快速、敏感、特异的实验室检测方法至关重要。与人类疾病关系密切的虫媒病毒主要集中于披膜病毒科、黄病毒科、布尼亚病毒科和呼肠孤病毒科的某些成员。本研究通过对披膜病毒科的委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus,VEEV)nsp1基因、黄病毒科的蜱传脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus,TBEV)NS1基因、布尼亚病毒科的新疆出血热病毒(Xinjiang hemorrhagic fever Virus,XHFV)S基因序列进行保守性分析,各设计出一套能分别检测这三种病毒所有亚型的特异性PCR引物和Taqman探针。以体外转录制备的RNA为模板,通过反应体系和条件优化,分别建立了检测这三种虫媒病毒的一步法荧光定量RT-PCR方法,三种方法的扩增效率分别为:VEEV 98.1%、TBEV 98.4%、XHFV100%。对体外转录的RNA模板检测表明:VEEV荧光定量RT-PCR方法的检测灵敏度达到3.27×102拷贝/μl,TBEV检测灵敏度达到5.82×102拷贝/μl,XHFV检测灵敏度达到9.80×102拷贝/μl。与针对上述病毒的普通PCR方法相比,本研究中三种方法的检测灵敏度高于已报道的现有方法或与之相当。特异性实验结果显示,三种方法均具有良好的特异性,与引起相似症状或与目标病毒同源性较高的同属病毒不产生非特异性扩增。本研究建立的上述检测方法为相关疫病的流行病学调查、监测和快速诊断提供了有效的技术手段。
【关键词】：委内瑞拉马脑炎病毒 蜱传脑炎病毒 新疆出血热病毒 一步法荧光定量RT-PCR 检测
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R535;S852.65
【目录】：

• 摘要3-4
• Abatract4-6
• 英文缩写词表6-8
• 前言8-10
• 第一篇 文献综述10-20
• 第一章 三种虫媒病毒及其实验室检测方法10-16
• 1.1 三种虫媒病毒概述10-14
• 1.2 三种虫媒病毒常用实验室检测方法14-16
• 第二章 荧光定量RT-PCR的研究进展16-20
• 2.1 荧光定量PCR的基本原理16-17
• 2.2 荧光定量PCR的种类17-19
• 2.3 荧光定量PCR的特点19-20
• 第二篇 研究内容20-70
• 第一章 委内瑞拉马脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立20-41
• 1.1 材料和方法20-29
• 1.2 结果29-39
• 1.3 讨论39-40
• 1.4 小结40-41
• 第二章 蜱传脑炎病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立41-55
• 2.1 材料和方法41-44
• 2.2 结果44-53
• 2.3 讨论53-54
• 2.4 小结54-55
• 第三章 新疆出血热病毒一步法荧光定量RT-PCR方法的建立55-70
• 3.1 材料和方法55-58
• 3.2 结果58-68
• 3.3 讨论68-69
• 3.4 小结69-70
• 结论70-71
• 参考文献71-78
• 作者简介78-79
• 致谢79

【共引文献】

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