miR-141调控丙型肝炎病毒感染肝癌细胞的机制研究

发布时间：2022-01-09 11:11

　　目的:探讨micro RNA-141（miR-141）在Hepatitis C virus（HCV）感染过程中发挥的作用。主要从两方面进行研究,miR-141对HCV进入宿主细胞的调节机制及对interferonβ（IFNβ）信号通路的改变及HCV复制的影响。方法:利用q RT-PCR检测miR-141及相关基因的m RNA水平;Western blot和免疫组化等方法检测EPH receptor A2（Eph A2）及相关基因的蛋白表达;利用HCV病毒颗粒检测试剂盒测定制备的病毒滴度以及经处理的细胞培养上清中释放的病毒颗粒的滴度;利用免疫荧光检测进入细胞中的HCV颗粒、细胞表面受体的表达及共定位情况;用Target Scan、Pic Tar、star Base等在线软件预测miR-141的靶基因;利用UCSC、Reg RNA2.0等在线软件预测靶基因的启动子序列,并寻找靶基因与miR-141结合的位点;利用双荧光素酶报告基因试验验证miR-141与Eph A2之间的靶向关系及IFNβ和NF-κB p65的活性;利用si RNA敲低Eph A2和TLR8,分析敲低Eph A2与过表达m... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

miR-141与HCV感染的关系

华中科技大学博士学位论文29图1-2EphA2是miR-141的特异性靶点。（A）TargetScan预测miR-141与EphA2的结合位点；（B）双荧光素酶报告系统检测miR-141与EphA2的特异性关系；（C）qRT-PCR和Westernblot检测过表达miR-141后EphA2的mRNA和蛋白水平；（D）qRT-PCR和Westernblot检测HCV引起的肝癌及对应的癌旁组织中EphA2的mRNA和蛋白水平；（E）免疫组化检测HCV引起的肝癌组织及对应的临近癌旁组织中EphA2的表达。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001。Fig1-3EphA2wasthespecifictargetofmiR-141.(A)BindingsiteofmiR-141in3’UTRofEphA2predictedbyTargetScan.(B)SpecificitybetweenmiR-141andEphA2bydualluciferaseactivityassays.(C)DetectionoftheexpressionofEphA2incellsstablyexpressingmiR-141byqRT-PCRandWesternblot(D)ExpressionofthemRNAandproteinlevelofEphA2inHCV-inducedHCCdetectedbyqRTPCRandWesternblot(E)ExpressionofEphA2inHCV-inducedHCCbyimmunohistochemistry.*,p<0.05;**,p<0.01;***,p<0.001.

敲低EphA2对HCV进入的影响

【参考文献】：
期刊论文
[1]Huh7.5.1细胞感染HCV观察干扰素治疗后miRNA表达谱变化[J]. 鲁兖,邢小康,宋广忠,陈智.  浙江大学学报(医学版). 2011(06)

硕士论文
[1]miR-141对肝癌细胞Huh7迁移和对HCV复制能力影响的机制研究[D]. 徐正红.华中科技大学 2012



本文编号：3578605