淋病奈瑟菌NGO2105蛋白Passenger结构域的克隆表达、多克隆抗体制备及定位分析

发布时间：2022-02-17 17:33

　　目的拟原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的Passenger结构域并制备多克隆抗血清,初步分析其保守性及亚细胞定位。方法 PCR扩增Passenger结构域编码基因并克隆入pCold TF原核表达质粒中,重组质粒转化大肠杆菌E.coil DH5α,通过PCR和测序鉴定后,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）菌中诱导表达目的蛋白,纯化目的蛋白后免疫BALB/c小鼠以制备多克隆抗体。Western blot分析NGO2105蛋白在临床分离菌株中的保守性。采用流式细胞技术分析淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白Passenger结构域细胞定位。结果成功表达出可溶形式的NGO2105蛋白Passenger结构域,重组蛋白免疫小鼠后可获得效价达到5.12×10⁵的多克隆抗血清,Western blot分析显示Passenger抗血清能与不同临床分离菌株中的NGO2105蛋白特异性反应,流式细胞技术分析显示Passenger结构域定位于淋病奈瑟菌菌体表面。结论成功获得可溶形式表达的Passenger蛋白及其多克隆抗体,NGO2105蛋白在临床分离的淋病奈瑟菌中有较好的保守性... 

【文章来源】：中国皮肤性病学杂志. 2020,34(03)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 菌株及质粒
    1.2 实验动物
    1.3 主要试剂
    1.4 方法
        1.4.1 引物设计
        1.4.2 PCR扩增目的基因
        1.4.3 pCold TF-Passenger重组质粒的构建、筛选及鉴定
        1.4.4 重组蛋白的诱导表达
        1.4.5 制备多克隆抗体及检测抗体效价
        1.4.6 Western blot分析Passenger结构域蛋白保守性
        1.4.7 流式细胞技术对Passenger结构域蛋白定位分析
2 结果
    2.1 pCold TF-Passenger原核表达载体的构建
    2.2 重组Passenger蛋白的诱导表达及纯化
    2.3 抗Passenger蛋白多克隆抗血清制备及鉴定
    2.4 Passenger结构域在淋病奈瑟菌临床分离菌株中的保守性分析
    2.5 流式细胞技术对Passenger结构域蛋白定位分析
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]淋球菌耐药现状及新药研究进展[J]. 刘兰兰,田丽闪,袁军,吴秋红,李武,张莉,孙思,陈威英,罗珍冑.  中国艾滋病性病. 2019(03)
[2]淋球菌por,tbpB基因序列变异和系统进化探讨[J]. 黄美容,黄健,闵迅,杨昌伟,张绍基,颜利江.  中国皮肤性病学杂志. 2015(12)
[3]遵义地区淋病奈瑟菌多抗原序列分型及耐药性分析[J]. 黄健,黄美容,於薇,黄娅娅,陈泽慧,陈安林,闵迅.  临床检验杂志. 2014(10)



本文编号：3629827