白假丝酵母菌胞壁多糖对巨噬细胞免疫功能影响及其机制探讨

发布时间：2022-07-29 21:06

　　目的:人类皮肤是由多种多样的真菌种属广泛定植的。一些假丝酵母菌种属,特别是白假丝酵母菌不仅作为共生菌定植于皮肤,还能通过在定植组织中不断增殖诱发感染。然而皮肤屏障的抵抗机制是最为有效的,包括常驻的非免疫细胞及免疫细胞,还有被招募至感染部位的免疫细胞都参与到抵御微生物的活动中。因此,皮肤是抵御真菌感染的有效屏障。目前大部分研究聚焦于假丝酵母菌与宿主上皮细胞的共生与致病性研究,主要围绕口腔、胃肠道及阴道上皮细胞,但是对于假丝酵母菌与皮肤间相互作用的机制研究甚少。近几十年内,细菌与真菌群落对人类皮肤的定植被广泛研究,但是关于宿主与真菌间的互作关系了解不足。目前,不同的真菌包括马拉瑟菌、隐球菌、红色酵母菌及假丝酵母菌种属被认为是人类皮肤的共生菌。在原发性免疫缺陷的患者中,真菌多样性,尤其是假丝酵母菌的富集在皮肤中明显升高。虽然部分真菌是皮肤微生物组的共生菌,一些种属还是具有致病性的。据统计20-25%的世界人口中受到真菌感染的影响。皮肤真菌感染的病原体可以分为两类:皮肤癣菌及酵母菌,而假丝酵母菌属于后者。在二百种已知的假丝酵母菌种属中,只有热带假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌在健康皮肤上常常被发现,... 

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 :白假丝酵母菌多糖的提取、分离纯化及鉴别
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要试剂和仪器
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
        2.2 实验方法
            2.2.1 粗多糖提取
            2.2.2 DEAE-Sepharose FF柱分离纯化
            2.2.3 白假丝酵母菌胞壁多糖的分子量测定
            2.2.4 白假丝酵母菌胞壁多糖的糖基分析
            2.2.5 白假丝酵母菌胞壁多糖的紫外光谱(UV)检测
            2.2.6 白假丝酵母菌胞壁多糖的红外光谱(FT-IR)检测
            2.2.7 白假丝酵母菌胞壁多糖的核磁共振谱(NMR)检测
    3 结果
        3.1 粗多糖提取的洗脱图谱
        3.2 各组分均一度及分子量测定
        3.3 糖基组成分析
        3.4 NMR分析
    4 讨论
    5 结论
第二部分 :白假丝酵母菌胞壁多糖作用于小鼠巨噬细胞的组学分析
    1 前言
    2 材料及方法
        2.1 仪器、材料和试剂
        2.2 分析软件
    3 结果
        3.1 转录组结果分析
            3.1.1 eggNOG Gr·oup分析
            3.1.2 表达差异基因分析
            3.1.3 表达差异GO富集分析
            3.1.4 表达差异KO分析
            3.1.5 KEGG富集分析
            3.1.6 差异基因的互作分析
            3.1.7 差异表达基因聚类分析
        3.2 蛋白组学分析结果
            3.2.1 差异蛋白在对照组与实验组中的分布
            3.2.2 差异表达蛋白质GO富集分析
            3.2.3 差异蛋白的功能分析结果
            3.2.4 KEGG通路注释
            3.2.5 差异表达蛋白质KEGG通路富集分析
            3.2.6 蛋白质聚类分析
            3.2.7 差异蛋白的互作分析
        3.3 转录组及蛋白组表达关联分析
            3.3.1 定量关联相关性分析
            3.3.2 定量关联分类
            3.3.3 表达趋势相同的差异蛋白及差异基因
            3.3.4 表达差异的蛋白及表达无差异的基因
            3.3.5 表达无差异的蛋白及表达差异的基因
            3.3.6 表达无差异的蛋白及表达无差异的基因
            3.3.7 关联结果功能注释
            3.3.8 GO注释分析
            3.3.9 COG注释
            3.3.10 Pathway注释分析
            3.3.11 定量蛋白与基因聚类分析结果
    4 讨论
    5 结论
第三部分 :白假丝酵母菌甘露糖蛋白通过AKT信号通路对巨噬细胞极化影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 仪器、材料和试剂
            2.1.1 仪器
            2.1.2 材料和试剂
            2.1.3 主要试剂配制
        2.2 实验方法
            2.2.1 细胞传代
            2.2.2 细胞冻存
            2.2.3 细胞复苏
            2.2.4 提取细胞RNA
            2.2.5 c DNA的制备
            2.2.6 RT-PCR
            2.2.7 Western blot
            2.2.8 免疫组化
            2.2.9 Icelligence测试细胞增殖曲线
            2.2.10 小鼠朗格汉斯细胞的提取
            2.2.11 流式检测细胞吞噬功能实验步骤
            2.2.12 流式检测细胞周期实验步骤
            2.2.13 流式检测细胞凋亡步骤
    3 结果
        3.1 白假丝酵母菌胞壁多糖作用小鼠巨噬细胞的数条通路
        3.2 白假丝酵母菌胞壁多糖刺激巨噬细胞的活化作用
            3.2.1 巨噬细胞向 M1 方向活化
            3.2.2 白假丝酵母菌多糖通过激活AKT信号通路,刺激巨噬细胞增殖、抑制凋亡
            3.2.3 白假丝酵母菌多糖通过激活AKT信号通路,增强巨噬细胞ROS及 NO的产生。
            3.2.4 白假丝酵母菌多糖刺激巨噬细胞后,增强其吞噬功能及杀菌能力
            3.2.5 白假丝酵母菌胞壁多糖甘露糖蛋白通过 AKT 信号通路激活巨噬细胞向 M1 极化
            3.2.6 白假丝酵母菌胞壁多糖通过AKT2 诱导M1 活化,通过AKT1及AKT2作用细胞周期及凋亡
        3.3 白假丝酵母菌胞壁多糖对小鼠皮肤内巨噬细胞的影响
        3.4 小鼠朗格汉斯细胞的吞噬功能及成熟功能在白假丝酵母菌胞壁多糖的作用下的改变
        3.5 白假丝酵母菌胞壁多糖激活小鼠巨噬细胞的ERK通路
        3.6 白假丝酵母菌胞壁多糖激活小鼠巨噬细胞的NF-κB通路,上调TNFaIP2 表
        3.7 β(1,3)葡聚糖对巨噬细胞的作用通路
    4 讨论
    5 结论
第四部分 :霍乱弧菌的毒力调控元ToxR通过锰离子转运体调控活性氧抗性
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 仪器、材料和试剂
            2.1.1 仪器及试剂
            2.1.2 材料
        2.2 实验方法
    3 结果
        3.1 霍乱弧菌的毒力缺失株在过氧化氢作用下存活率
        3.2 Transposon建立文库在过氧化氢下筛选
        3.3 插入位点VC0022 引起抗过氧化能力提升
        3.4 建立mneA缺失株及toxR mneA双基因缺失株
        3.5 mneA菌株在含有MnCl2 培养基中生长受限
        3.6 mneA菌株在Mn2+中生长受限可被Fe2+恢复
        3.7 mneA在 Mn2+的诱导下表达量增加
        3.8 toxR抑制mneA的表达
        3.9 补充的Mn2+可提升toxR的过氧化抗性
        3.10 百草枯产生的超氧化物对toxR杀伤力升高
        3.11 ompU缺失株的抗过氧化能力下降
        3.12 锰离子影响mneA的转录
        3.13 ROS荧光探针检测各菌株内ROS含量
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
在学期间科研成绩
致谢
个人简历



本文编号：3667183