Ⅰ型干扰素和白细胞介素11在肝脏疾病中的免疫功能及干预研究
发布时间：2022-08-04 17:26
慢性感染性疾病以及恶性肿瘤严重威胁着当今世界人类的健康。近年来虽然出现了众多抗感染药物,对肿瘤的发病机制也从细胞水平到分子水平有了更为深入的认识,同时肿瘤靶向药物和小分子抑制剂的应用也取得了一定程度的临床疗效,然而在治疗过程中仍然存在着各种需要改善的问题,如何提高慢性感染性疾病以及恶性肿瘤的临床治疗效果已经成为亟待解决的重要问题之一。慢性乙型肝炎在世界范围内,尤其在亚洲地区,感染者数目仍然很多。目前治疗慢性乙型肝炎的药物主要分为干扰素和核苷或者核苷酸类似物等。然而在临床治疗过程中发现,只有干扰素才能够在部分乙肝患者中达到清除HBsAg及HBeAg的效果,其机理有很多,主要认为可能是通过STAT1分子向下游传递信号,从而诱导干扰素刺激基因的表达。因此对于干扰素应答与不应答患者之间的免疫学机制研究,从而寻找能够提高干扰素疗效的策略,已经成为关注的重要问题。T细胞与自然杀伤细胞（NK细胞）对抗病毒感染等起着至关重要的促进作用,但在慢性感染过程中,T细胞和NK细胞往往处于功能耗竭的状态。细胞因子IL-2对多种免疫细胞有着活化与扩增的作用,而且曾经应用于多种肿瘤的临床治疗。但是对于继干扰素使用后...
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论乙肝和肝癌治疗研究现状
1.1 乙肝
1.1.1 慢性乙型肝炎的诊断及其感染过程
1.1.2 乙肝病毒特征
1.1.3 乙型肝炎与STAT信号相关免疫应答
1.1.4 慢性HBV感染的治疗
1.1.4.1 核苷类似物的治疗
1.1.4.2 干扰素的治疗
1.1.4.3 核苷类似物及干扰素联合治疗
1.1.4.4 肝炎其他治疗策略及目前肝炎治疗过程中存在的其他问题
1.1.5 I型干扰素调控免疫细胞功能
1.1.6. IL-2及其免疫治疗
1.2 肝癌
1.2.1 肝癌的分类及诊断
1.2.2 肝癌的流行病学及发生机制
1.2.3 肝再生
1.2.4 肝癌的治疗
1.2.4.1 手术
1.2.4.2 肝移植
1.2.4.3 介入放射
1.2.4.4 肝癌的化学治疗
1.2.4.5 免疫治疗
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 临床标本
2.1.2 实验动物
2.1.3 原代细胞培养相关试剂
2.1.4 细胞系及培养基
2.1.5 细菌培养及相关试剂
2.1.6 质粒及抽提试剂
2.1.7 RNA体外转录质粒及相关试剂
2.1.8 细胞因子及小分子抑制剂
2.1.9 细胞分离和纯化试剂
2.1.10 总RNA提取和RT-PCR试剂
2.1.11 核酸序列
2.1.12 PCR试剂和核酸电泳试剂
2.1.13 Western blotting试剂
2.1.14 流式抗体
2.1.15 免疫荧光及流式细胞术检测相关试剂
2.1.16 免疫组化及HE染色试剂
2.1.17 细胞三维立体培养试剂
2.1.18 抗原特异性T细胞检测试剂
2.1.19 ELISA检测试剂
2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 临床试验
2.3.1.1 临床试验Ⅰ
2.3.1.2 临床试验Ⅱ
2.3.2 人单个核细胞分离及CD8~+T细胞的纯化
2.3.3 人肝癌组织基因芯片数据分析
2.3.4 细胞总RNA提取及RT-PCR检测
2.3.5 荧光定量PCR检测
2.3.6 流式细胞术检测
2.3.7 小鼠血清采集
2.3.8 放射免疫检测
2.3.9 免疫荧光实验
2.3.10 免疫组化、HE染色、Masson染色及天狼猩红染色实验
2.3.11 抗原特异性CD8~+T细胞检测
2.3.12 ELISA检测细胞因子
2.3.13 RTCA检测细胞杀伤
2.3.14 Western blotting
2.3.15 基因缺陷小鼠构建
2.3.16 小鼠原发肝癌模型构建
2.3.17 小鼠自发肝癌模型及移植瘤模型构建
2.3.18 小鼠HBV模型构建
2.3.19 小鼠肝癌手术切除
2.3.20 小鼠肝癌模型治疗
2.3.21 小鼠肝炎模型治疗
2.3.22 小鼠组织单个核细胞的分离
2.3.23 统计学分析
第三章 序贯IL-2治疗有利于提高难治性无应答乙肝患者的免疫功能
3.1 引言
3.2 Peg-IFN-α-2b治疗后多数CHB患者呈现无应答状态
3.3 Peg-IFN-α-2b治疗后IL-2Rα在CD4~+T细胞表达显著降低
3.4 体外使用IL-2促进外周T细胞和NK细胞表达IFN-γ及TNF-α
3.5 体外使用IL-2促进人肝脏淋巴细胞表达IFN-γ
3.6 无应答患者序贯使用IL-2治疗可抑制负调免疫应答
3.7 无应答患者序贯使用IL-2治疗可促进STAT1活化
3.8 无应答患者序贯使用IL-2治疗可促进分泌IFN-γ及TNF-α
3.9 无应答患者序贯使用IL-2治疗可提高CD8~+T细胞毒性及抗原特异性CD8~+T细胞比例
3.10 序贯使用IL-2治疗可提高难治性无应答患者临床治疗效果
3.11 经Peg-IFNα-2b治疗后CHB患者外周血中CD24~+CD38~(hi)B细胞显著增加
3.12 Peg-IFNα可诱导CD24~+CD38~(hi) B细胞形成并产生大量IL-10
3.13 CD24~+CD38~(hi)B细胞抑制T细胞及NK细胞抗病毒能力
3.14 靶向CD24分子可清除CD24~+CD38~(hi)B细胞
3.15 anti-CD24抗体联合干扰素提高HBV耐受小鼠的治疗效果
3.16 讨论与总结
第四章 肝切除通过IL-11-STAT3信号途经促进肝癌术后复发
4.1 引言
4.2 手术后肝癌可复发
4.3 手术诱导肝癌过度生长
4.4 手术后IL-11水平升高
4.5 IL-11信号对术后肝癌生长是必要的
4.6 抑制IL-11信号可促进肿瘤细胞凋亡
4.7 Napabucasin可抑制WT鼠肝癌术后复发
4.8 Napabucasin可抑制Il6~(KO)鼠肝癌术后复发
4.9 Napabucasin能够抑制同种移植模型中肝癌术后复发
4.10 Napabucasin可防止IL-11诱导的肝癌过度生长
4.11 讨论与总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间的主要研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]42,573 cases of hepatectomy in China: a multicenter retrospective investigation[J]. Binhao Zhang,Bixiang Zhang,Zhiwei Zhang,Zhiyong Huang,Yifa Chen,Minshan Chen,Ping Bie,Baogang Peng,Liqun Wu,Zhiming Wang,Bo Li,Jia Fan,Lunxiu Qin,Ping Chen,Jingfeng Liu,Zhe Tang,Jun Niu,Xinmin Yin,Deyu Li,Songqing He,Bin Jiang,Yilei Mao,Weiping Zhou,Xiaoping Chen. Science China（Life Sciences）. 2018(06)
[2]New advances in hepatocellular carcinoma[J]. Sonia Pascual,Iván Herrera,Javier Irurzun. World Journal of Hepatology. 2016(09)
本文编号：3669967
【文章页数】：136 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 绪论乙肝和肝癌治疗研究现状
1.1 乙肝
1.1.1 慢性乙型肝炎的诊断及其感染过程
1.1.2 乙肝病毒特征
1.1.3 乙型肝炎与STAT信号相关免疫应答
1.1.4 慢性HBV感染的治疗
1.1.4.1 核苷类似物的治疗
1.1.4.2 干扰素的治疗
1.1.4.3 核苷类似物及干扰素联合治疗
1.1.4.4 肝炎其他治疗策略及目前肝炎治疗过程中存在的其他问题
1.1.5 I型干扰素调控免疫细胞功能
1.1.6. IL-2及其免疫治疗
1.2 肝癌
1.2.1 肝癌的分类及诊断
1.2.2 肝癌的流行病学及发生机制
1.2.3 肝再生
1.2.4 肝癌的治疗
1.2.4.1 手术
1.2.4.2 肝移植
1.2.4.3 介入放射
1.2.4.4 肝癌的化学治疗
1.2.4.5 免疫治疗
第二章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 临床标本
2.1.2 实验动物
2.1.3 原代细胞培养相关试剂
2.1.4 细胞系及培养基
2.1.5 细菌培养及相关试剂
2.1.6 质粒及抽提试剂
2.1.7 RNA体外转录质粒及相关试剂
2.1.8 细胞因子及小分子抑制剂
2.1.9 细胞分离和纯化试剂
2.1.10 总RNA提取和RT-PCR试剂
2.1.11 核酸序列
2.1.12 PCR试剂和核酸电泳试剂
2.1.13 Western blotting试剂
2.1.14 流式抗体
2.1.15 免疫荧光及流式细胞术检测相关试剂
2.1.16 免疫组化及HE染色试剂
2.1.17 细胞三维立体培养试剂
2.1.18 抗原特异性T细胞检测试剂
2.1.19 ELISA检测试剂
2.2 实验仪器
2.3 实验方法
2.3.1 临床试验
2.3.1.1 临床试验Ⅰ
2.3.1.2 临床试验Ⅱ
2.3.2 人单个核细胞分离及CD8~+T细胞的纯化
2.3.3 人肝癌组织基因芯片数据分析
2.3.4 细胞总RNA提取及RT-PCR检测
2.3.5 荧光定量PCR检测
2.3.6 流式细胞术检测
2.3.7 小鼠血清采集
2.3.8 放射免疫检测
2.3.9 免疫荧光实验
2.3.10 免疫组化、HE染色、Masson染色及天狼猩红染色实验
2.3.11 抗原特异性CD8~+T细胞检测
2.3.12 ELISA检测细胞因子
2.3.13 RTCA检测细胞杀伤
2.3.14 Western blotting
2.3.15 基因缺陷小鼠构建
2.3.16 小鼠原发肝癌模型构建
2.3.17 小鼠自发肝癌模型及移植瘤模型构建
2.3.18 小鼠HBV模型构建
2.3.19 小鼠肝癌手术切除
2.3.20 小鼠肝癌模型治疗
2.3.21 小鼠肝炎模型治疗
2.3.22 小鼠组织单个核细胞的分离
2.3.23 统计学分析
第三章 序贯IL-2治疗有利于提高难治性无应答乙肝患者的免疫功能
3.1 引言
3.2 Peg-IFN-α-2b治疗后多数CHB患者呈现无应答状态
3.3 Peg-IFN-α-2b治疗后IL-2Rα在CD4~+T细胞表达显著降低
3.4 体外使用IL-2促进外周T细胞和NK细胞表达IFN-γ及TNF-α
3.5 体外使用IL-2促进人肝脏淋巴细胞表达IFN-γ
3.6 无应答患者序贯使用IL-2治疗可抑制负调免疫应答
3.7 无应答患者序贯使用IL-2治疗可促进STAT1活化
3.8 无应答患者序贯使用IL-2治疗可促进分泌IFN-γ及TNF-α
3.9 无应答患者序贯使用IL-2治疗可提高CD8~+T细胞毒性及抗原特异性CD8~+T细胞比例
3.10 序贯使用IL-2治疗可提高难治性无应答患者临床治疗效果
3.11 经Peg-IFNα-2b治疗后CHB患者外周血中CD24~+CD38~(hi)B细胞显著增加
3.12 Peg-IFNα可诱导CD24~+CD38~(hi) B细胞形成并产生大量IL-10
3.13 CD24~+CD38~(hi)B细胞抑制T细胞及NK细胞抗病毒能力
3.14 靶向CD24分子可清除CD24~+CD38~(hi)B细胞
3.15 anti-CD24抗体联合干扰素提高HBV耐受小鼠的治疗效果
3.16 讨论与总结
第四章 肝切除通过IL-11-STAT3信号途经促进肝癌术后复发
4.1 引言
4.2 手术后肝癌可复发
4.3 手术诱导肝癌过度生长
4.4 手术后IL-11水平升高
4.5 IL-11信号对术后肝癌生长是必要的
4.6 抑制IL-11信号可促进肿瘤细胞凋亡
4.7 Napabucasin可抑制WT鼠肝癌术后复发
4.8 Napabucasin可抑制Il6~(KO)鼠肝癌术后复发
4.9 Napabucasin能够抑制同种移植模型中肝癌术后复发
4.10 Napabucasin可防止IL-11诱导的肝癌过度生长
4.11 讨论与总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间的主要研究成果
【参考文献】：
期刊论文
[1]42,573 cases of hepatectomy in China: a multicenter retrospective investigation[J]. Binhao Zhang,Bixiang Zhang,Zhiwei Zhang,Zhiyong Huang,Yifa Chen,Minshan Chen,Ping Bie,Baogang Peng,Liqun Wu,Zhiming Wang,Bo Li,Jia Fan,Lunxiu Qin,Ping Chen,Jingfeng Liu,Zhe Tang,Jun Niu,Xinmin Yin,Deyu Li,Songqing He,Bin Jiang,Yilei Mao,Weiping Zhou,Xiaoping Chen. Science China（Life Sciences）. 2018(06)
[2]New advances in hepatocellular carcinoma[J]. Sonia Pascual,Iván Herrera,Javier Irurzun. World Journal of Hepatology. 2016(09)
本文编号：3669967
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