改良单叠氮丙啶-荧光定量PCR法的建立及其检测抗结核药物活性的价值

发布时间：2023-05-06 16:48

　　目的建立改良单叠氮丙啶(propidium monoazide xx,PMAxx)-荧光定量PCR(qPCR)鉴定MTB活菌和热灭活菌的方法,并探讨PMAxx-qPCR进行抗结核药物体外活性检测的价值。方法通过活菌和热灭活菌优化PMAxx针对MTB菌株H37Rv的预处理条件,包括曝光时间、暗孵育时间、PMAxx浓度,以及靶标DNA片段长度等。通过绘制量效曲线和建立循环阈值(Cq)与菌负荷的标准曲线,应用PMAxx-qPCR法计算测定异烟肼(INH)、利福平(RFP)的体外抗菌活性,评价检测敏感度,并分别与微孔板Alamar Blue(MABA)法和菌落形成单位(CFU)计数法进行比较,菌落计数采用独立样本t检验进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果当细菌负荷设定为10⁷ CFU/ml时,在PMAxx浓度为10μmol/L、暗孵育10 min后曝光15 min可有效鉴别活菌、死菌(△Cq_死-活=6.772±0.453),且使用>200 bp靶标片段可更有效地反映活菌、死菌的差异。PMAxx-qPCR方法在药物作用后3d...

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【文章目录】：
资料和方法
    一、结核分枝杆菌标准株
    二、主要试剂和仪器
        1.试剂:
        2.仪器:
    三、实验方法
        (一)菌液制备
        (二)PMAxx处理条件优化
        (三)PMAxx处理的相关影响因素
        (四)抗结核药物活性检测
    四、统计学处理
结果
讨论



本文编号：3809272