恶性疟原虫快速诊断试剂盒的研制

发布时间：2023-05-13 10:12

　　疟疾(Malaria)是一种严重危害人类健康的传染性寄生虫病,由疟原虫经按蚊传播引起。世界卫生组织(WHO)最新报告,2016年仍有2.16亿疟疾病例爆发,其中死亡人数达44.5万,分布在全球的91个国家。约90%的疟疾病例和死亡人数发生在非洲。恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)是感染人类的四种疟原虫中最为致命的,其主要流行于非洲国家。简便准确的快速及时诊断技术对疟疾的防治有重要意义,可指导准确用药,避免耐药和病情恶化,还可监控和预防疟疾的大规模暴发流行。富组氨酸蛋白2(Histidine-rich protein 2,HRP2)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)是恶性疟原虫检测中常用的两种标志物。HRP2因其具有较高的灵敏度,从而在恶性疟原虫的检测中具有更广泛的应用,而LDH可以作为HRP2基因缺失的疟原虫的检测标志物。因此,试剂若能同时检出两种标志物,则可避免单一标志物检测的不足,具有更高的敏感性。本课题采用胶体金免疫层析技术及双抗体夹心法,研制成功了一种用于检测人血液中恶性疟原虫特异性HRP2和LDH的快速诊断试剂(RDT)。...

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 疟疾概述
    1.2 疟疾流行现状
        1.2.1 全球流行现状
        1.2.2 我国流行现状
    1.3 疟疾诊断方法介绍
        1.3.1 厚薄血膜涂片显微镜检查法
        1.3.2 PCR检测法
        1.3.3 快速诊断试剂(RDT)
    1.4 RDT在疟疾防治工作中的作用
    1.5 恶性疟原虫的生物标志物
        1.5.1 富组氨酸蛋白2(Histidine-rich protein2,HRP2)
        1.5.2 乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)
        1.5.3 醛缩酶(Aldolase,ALD)
    1.6 本课题的主要研究内容和意义
        1.6.1 主要研究内容
        1.6.2 研究意义
第二章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂与材料
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要溶液的配制
        2.1.4 主要样本
    2.2 实验方法
        2.2.1 实验原理
        2.2.2 自制参考品的制备
        2.2.3 胶体金的制备
        2.2.4 Pf-HRP2抗体对的选择
        2.2.5 Pf-LDH抗体对的选择
        2.2.6 硝酸纤维素膜的选择
        2.2.7 抗体标记工艺优化
        2.2.8 金标记物稀释缓冲液工艺优化
        2.2.9 金标记物结合垫工艺优化
        2.2.10 抗体包被工艺优化
        2.2.11 样本稀释液工艺优化
        2.2.12 性能评估
        2.2.13 稳定性研究
        2.2.14 色标卡体系
        2.2.15 临床验证
第三章 结果和讨论
    3.1 自制参考品特性
        3.1.1 基质血特性
        3.1.2 阴性参考品特性
        3.1.3 阳性参考品特性
        3.1.4 精密性参考品特性
    3.2 恶性疟原虫快速诊断试剂盒的研制工艺
        3.2.1 胶体金特性
        3.2.2 Pf-HRP2抗体对的选择标准
        3.2.3 Pf-LDH抗体对的选择标准
        3.2.4 硝酸纤维素膜的选择标准
        3.2.5 抗体标记工艺优化
        3.2.6 金标记物稀释缓冲液工艺优化
        3.2.7 金标记物结合垫工艺优化
        3.2.8 抗体包被工艺优化
        3.2.9 样本稀释液工艺优化
    3.3 性能评估
        3.3.1 分析灵敏度
        3.3.2 分析特异性
        3.3.3 精密性
        3.3.4 钩状效应
    3.4 国家参考品测试
    3.5 稳定性研究
        3.5.1 加速稳定性
        3.5.2 运输稳定性
        3.5.3 开封稳定性
        3.5.4 实时稳定性
    3.6 临床验证
        3.6.1 临床样本统计
        3.6.2 临床结果统计
    3.7 讨论
        3.7.1 建立自制参考品
        3.7.2 研制恶性疟原虫快速诊断试剂盒
        3.7.3 评价恶性疟原虫快速诊断试剂盒
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 展望
参考文献
附录1
致谢
攻读硕士学位期间已发表或录用的论文



本文编号：3815720